白藜蘆醇對人腎癌786-0細胞周期、凋亡及凋亡相關(guān)基因PDCD5表達的影響.pdf

1、目的：探討白藜蘆醇對人腎癌786-0細胞凋亡相關(guān)基因PDCD5 mRNA、蛋白表達及其細胞周期、增殖的影響。
　　 方法：人腎癌786-0細胞，經(jīng)復蘇孵育，體外培養(yǎng)至對數(shù)生長期傳代分為不同的實驗組，分別用12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L的白藜蘆醇(RES)分別處理腎癌786-0細胞24h、48h、72h。倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學的改變；應用免疫細胞化學法和原位雜交技術(shù)檢測各組細胞中P

2、DCD5蛋白和mRNA的表達情況；采用流式細胞技術(shù)檢測各組細胞的增殖情況；應用TUNEL法檢測各組細胞的凋亡情況。
　　 結(jié)果
　　 1.倒置顯微鏡下觀察人腎細胞癌786-0細胞發(fā)現(xiàn)：細胞外形為梭形，圓形或多邊形。細胞輪廓不模糊。說明人腎細胞癌786-0細胞生長狀態(tài)較好。經(jīng)過白藜蘆醇處理過24h后的人腎細胞癌786-0細胞，細胞數(shù)目明顯減少，細胞的體積縮小細胞核發(fā)生縮小、變圓等現(xiàn)象。
　　 2.免疫細胞化學結(jié)果：

3、經(jīng)過12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L4種不同濃度的白藜蘆醇(RES)處理人腎癌786-0細胞24h、48h、72h后PDCD5蛋白表達開始升高。25μmol/L白藜蘆醇作用24h后，PDCD5蛋白表達狀況為：2.90±0.13，3.08±0.21，3.23±0.21與空白對照組(1.10±0.19，1.13±0.21，1.42±0.25)相比，差異有顯著性，(P<0.05)。繼續(xù)升高藥物濃度P

4、DCD5蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，且當作用時間達到24小時后，繼續(xù)增加作用時間，PDCD5蛋白表達增高之間的差異也沒有顯著性(P>0.05)。
　　 3.原位雜交結(jié)果：12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L4種不同濃度的白藜蘆醇處理人腎癌786-0細胞1d、2d、3d后PDCD5 mRNA的表達就開始升高。當白藜蘆醇濃度達到25μmol/L，PDCD5 mRNA的表達情況為3

5、.35±0.23，3.40±0.31，3.60±0.26與空白對照組相比(1.47±0.27，1.78±0.38，1.88±0.31)(P<0.05)。且當作用時間達到24小時后，繼續(xù)增加作用時間，PDCD5mRNA表達增高之間的差異也沒有顯著性(P>0.05)。
　　 4.流式細胞技術(shù)檢測細胞周期的變化：人腎癌786-0細胞在經(jīng)12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L的白藜蘆醇(RES)處理

6、24h后，25μmol/L白藜蘆醇處理組G1期細胞的比例為：65.28±3.10，G2期細胞的比例為9.67±0.43較空白對照組的細胞比例：75.23±2.58、11.35±2.37有所下降，且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。25μmol/L白藜蘆醇處理組S期的細胞比例為24.79±3.72較空白對照組的細胞比例13.17±1.36有所升高，且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，繼續(xù)升高藥物濃度各組間的差異無顯著性(P>0.05)。<

7、br>　　 5.TUNEL結(jié)果：25μmol/L白藜蘆醇處理組人腎癌786-0細胞凋亡的比例為：6.01±0.59，較空白對照組的細胞凋亡比例：0.73±0.25有所下降，且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。當白藜蘆醇的作用時間達到24小時后，繼續(xù)增加作用時間白藜蘆醇處理組人腎癌786-0細胞凋亡的比例分為：5.90±0.50，5，97±0.25，較空白對照組的細胞凋亡比例：0.90±0.20，，1.10±0.20升高明顯，差異有統(tǒng)計