槲皮素對人膀胱癌BIU-87細胞增殖及自噬的影響.pdf

1、[目的]
　　 1.探討QUE對人膀胱癌BIU-87細胞生長抑制的影響，以及藥物濃度和作用時間對腫瘤細胞抑制的關系。
　　 2.探討QUE對人膀胱癌BIU-87細胞自噬標記物LC3表達的影響，以及自噬在對BIU-87細胞生長的影響。
　　 3.探討QUE對人膀胱癌BIU-87細胞自噬基因Beclin1的影響，以及藥物濃度及作用時間對細胞自噬表達的影響，初步探討自噬對腫瘤細胞的作用。
　　 4.期望為臨床治

2、療膀胱癌提供新的途徑，以及通過自噬途徑對腫瘤細胞的影響提供治療的理論依據，并可能為臨床上膀胱癌等腫瘤的綜合治療提供新的中西藥思路。
　　 [方法]
　　 1.人膀胱癌BIU-87細胞的復蘇與培養(yǎng)將凍存的BIU-87細胞取出，迅速放入37℃的恒溫水浴中，輕輕緩慢振蕩1分鐘，再將其移入培養(yǎng)瓶中，加入含20％胎牛血清的培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)并傳代。
　　 2.MTT(四氮唑藍)檢測法測定Que對BIU-87細胞增殖的抑

3、制率MTT檢測法測定對數期生長的BIU-87細胞，用酶標檢測儀以570nm波長進行比色，測吸光度值(A)，計算細胞抑制率。
　　 3.自噬標記物LC3免疫熒光的檢測運用間接免疫熒光法檢測LC3的表達，一抗和二抗分別與對數期生長的腫瘤細胞作用，充分反應后避光在熒光倒置顯微鏡下觀察細胞染色情況，拍攝LC3的綠色免疫熒光。再用胰酶消化離心后，流式細胞術檢測細胞的LC3染色表達率。
　　 4.實時定量RT-PCR檢測Beclin

4、1-mRNA將QUE不同濃度和時間作用后的BIU-87細胞，通過實時定量RT-PCR測定Beclin1基因的相對表達量，來推測Beclin1對細胞自噬的影響。
　　 [結果]
　　 1.實驗組的吸光度(A)值明顯低于對照組，不同實驗組的吸光度值隨著QUE濃度和時間的增加而降低(p<0.05)。
　　 2.與對照組比較，實驗組LC3綠色熒光表達水平較對照組明顯增強，不同濃度實驗組的LC3綠色熒光強度有明顯差別(p<

5、0.05)；FCM測定的實驗組細胞數量減少、染色率明顯高于對照組(p<0.05)。
　　 3.與對照組比較，實驗組Beclin1-mRNA表達水平較對照組明顯增高(p<0.05)，抽提的RNA產物完整，目的基因和內參基因的擴增和熔解曲線特異性好。
　　 [結論]
　　 1.QUE對BIU-87細胞的增殖有明顯的抑制作用，且此作用與QUE的作用時間和劑量有明顯的相關性，即隨著給藥時間的延長和濃度的增加，對腫瘤細胞抑