基于代謝組學的絡氣虛滯-郁滯證候病生理基礎及通絡干預研究.pdf

1、目的：以脈絡學說核心理論“營衛(wèi)承制調(diào)平”和氣血相關理論為指導，基于3469例血管病變患者臨床調(diào)查揭示的絡氣虛滯/郁滯為“脈絡-血管系統(tǒng)病”的始動因素并貫穿病變?nèi)^程，采用代謝組學方法探討西醫(yī)無明確診斷、但符合絡氣虛滯/郁滯證候辨證標準的亞健康人群血漿代謝物譜特征。模擬絡氣虛滯/郁滯證候表現(xiàn)建立大鼠證候模型，結合證候人群和前期證候大鼠代謝物譜變化，進一步探討絡氣虛滯/郁滯證候大鼠血漿酰肉堿、脂類代謝輪廓變化及通絡干預作用?；谔禺愋源x物

2、譜特征，闡明絡氣虛滯/郁滯證候大鼠血管內(nèi)皮結構與功能變化，同時在主動脈、心肌、腦組織觀察與肉堿、磷脂、5-羥色氨(5-HT)代謝相關的重要細胞因子、受體表達變化，并探討通絡藥物干預作用。基于上述臨床與基礎研究，初步揭示絡氣虛滯/郁滯證候的代謝組學特征及其對血管病變的影響與通絡干預作用，對闡明過度疲勞、情緒抑郁等社會心理行為因素在血管病變發(fā)病中的始動作用，并尋求有效干預策略和藥物具有重要意義。
　　 方法：
　　 本研究分

3、為以下三部分內(nèi)容：
　　 1 絡氣虛滯/郁滯證候人群代謝組學研究
　　 本研究基于3469例血管病變臨床調(diào)查揭示的絡氣虛滯/郁滯為“脈絡-血管系統(tǒng)病”始動因素并貫穿病變?nèi)^程，選取西醫(yī)臨床診斷無明顯病變，但符合“脈絡-血管系統(tǒng)病”辨證診斷標準中絡氣虛滯/郁滯證候判定標準的亞健康人群為研究對象。符合研究方案的78例受試者中，健康對照組28例，絡氣虛滯組26例，絡氣郁滯組24例，入選人群需進行血常規(guī)、空腹血糖、血脂（總膽固醇

4、、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白）、尿常規(guī)、肝功能（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）、腎功能（血尿素氮、血肌酐）、胸透、肝膽B(tài)超、心電圖檢查。抽取空腹血制備血漿，采用超高效液相色譜聯(lián)合離子阱-飛行時間質(zhì)譜(UFLC/MS-IT-TOF)分析血漿中代謝物譜變化，經(jīng)過數(shù)據(jù)格式轉(zhuǎn)換后導入SIMCA-P進行模式識別，使用正交信號校正偏最小二乘法判別分析(OSC-PLS-DA)方法對不同證候人群和健康對照人群進行區(qū)分。
　　 2 絡氣虛滯/郁滯證候大鼠

5、血漿酰肉堿、脂類代謝輪廓及通絡干預研究
　　 依據(jù)中醫(yī)“勞則氣耗”、“郁則氣結”理論，模擬絡氣虛滯/郁滯證候辨證診斷標準中特征性臨床表現(xiàn)，采用“基礎飲食+負重游泳”、束縛法分別建立絡氣虛滯和絡氣虛滯證候大鼠模型，并采用一般狀態(tài)觀察、生物學表征、力竭游泳時間、尾懸掛方法進行模型評價?；谇捌诮j氣虛滯/郁滯證候人群（脂代謝異常）和證候大鼠（肉堿代謝異常）代謝組學研究結果，選擇酰肉堿和脂類開展絡氣虛滯/郁滯證候大鼠代謝輪廓分析，分別采

6、用益氣通絡和流氣暢絡代表藥物人參（人參總皂苷）和薤白（薤白提取物）進行干預。酰肉堿分離檢測應用LC/MS，質(zhì)譜檢測采用正離子DynamicMRM模式；脂類分離分析在UFLC/IT-TOF MS上進行，質(zhì)譜檢測采用ESI正/負離子模式，同時采用多變量PCA分析和單變量非參數(shù)檢驗進行數(shù)據(jù)處理分析。
　　 3 絡氣虛滯/郁滯證候大鼠血管內(nèi)皮結構功能與主動脈、心腦組織CPT-I、磷脂、5-HT受體變化及通絡干預研究
　　 將10

7、5只Wistar雄性大鼠隨機分為7組：①正常對照組，②絡氣虛滯組，③絡氣郁滯組，④絡氣虛滯+人參總皂苷組，⑤絡氣虛滯+通心絡組，⑥絡氣郁滯+薤白提取物組，⑦絡氣郁滯+通心絡組。應用光鏡、電鏡觀察大鼠主動脈內(nèi)皮結構改變，采用放免法檢測反映血管內(nèi)皮功能的血漿內(nèi)皮素(ET-1)水平，硝酸還原酶法檢測血清一氧化氮(NO)水平。
　　 圍繞絡氣虛滯/郁滯證候代謝組學、代謝輪廓中潛在生物學標記物，在大鼠主動脈、心肌、腦組織血管病變主要病變組

8、織中深入開展與肉堿、磷脂、5-HT代謝相關的重要細胞因子、受體表達研究，并探討通絡藥物的干預作用。在肉堿相關研究中，采用高效液相檢測心肌能量負荷，實時熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測主動脈、心肌組織中介導能量代謝過程中線粒體脂肪酸β氧化過程限速反應的肉堿棕櫚酸轉(zhuǎn)移酶-I(CPTI)mRNA表達，同時觀察調(diào)控CPT-I的AMP激活的蛋白激酶亞基(AMPKa)、過氧化物酶體增殖物激活受體6(PPARδ)mRNA表達，Western

9、blot檢測主動脈、心肌組織CPT-I、AMPKa亞基、磷酸化AMPKa亞基、PPAR8蛋白水平。在磷脂相關研究中，采用ELISA方法檢測主動脈調(diào)控磷脂中溶血磷脂酰膽堿（LPC，ox-LDL的主要活性成分）生成的脂蛋白相關磷脂酶A2(Lp-PLA2)含量，RT-PCR和Western blot檢測主動脈4型G蛋白偶聯(lián)受體(GPR4)mRNA和蛋白表達。在5-HT相關研究中，采用ELISA方法檢測腦組織5-HT水平，RT-PCR檢測主動脈

10、5-HT1D受體、5-HT2A受體mRNA與腦組織5-HT1D受體、5-HT2A受體、色氨酸羥化酶(TPH)mRNA表達，Western blot檢測主動脈、腦組織5-HT1D受體、5-HT2A受體蛋白表達。
　　 結果：
　　 1 絡氣虛滯/郁滯證候人群代謝組學研究
　　 納入的亞健康受試者各項理化檢查均在正常范圍內(nèi)，血漿代謝組學分析顯示：絡氣虛滯/郁滯證候人群與健康對照人群均得到區(qū)分，與健康人群比較，絡氣虛滯

11、證候人群苯丙氨酸、色氨酸（5-HT的前體）均有上升趨勢（P＞0.05），LPCC17:2、LPCC18:2顯著降低(P＜0.05，0.01)，LPCC16:1、LPCC16:0、LPCC18:1、LPCC18:0均有降低趨勢(P＞0.05)。
　　 與健康對照人群比較，絡氣郁滯證候人群苯丙氨酸、亮氨酸、色氨酸及膽紅素顯著增加（P＜0.05，0.01），乙酰肉堿（與脂肪酸β氧化供給能量有關）有升高趨勢(P＞0.05)，LPCC16

12、:0、LPCC16:1、LPCC17:2、LPCC18:0、LPCC18:1、LPCC18:2顯著降低（P＜0.05，0.01）。
　　 基于三組人群血漿代謝譜的OSC-PLS-DA模型顯示，三組人群基本得到區(qū)分，與健康對照組比較，絡氣郁滯證候人群體內(nèi)重要代謝物比絡氣虛滯證候人群變化顯著。絡氣郁滯組苯丙氨酸、亮氨酸、色氨酸及膽紅素顯著增加(P＜0.05，0.01)，LPCC16:0、LPCC18:0、LPCC18:1、LPCC1

13、8:2顯著降低(P＜0.05，0.01)；絡氣虛滯組LPCC18:2顯著降低（P＜0.05）。
　　 2 絡氣虛滯/郁滯證候大鼠血漿酰肉堿、脂類代謝輪廓及通絡干預研究
　　 2.1絡氣虛滯/郁滯證候大鼠模型建立
　　 與正常對照組比較，絡氣虛滯組大鼠表現(xiàn)出倦怠懶惰，精神萎靡，行動遲緩甚則無力完成翻正反射，符合絡氣虛滯證候臨床表現(xiàn)；絡氣郁滯組大鼠造模初期表現(xiàn)為打斗、撕咬、尖叫等情緒過激行為，但隨著造模時間的延長，動

14、物表現(xiàn)為精神萎靡不振，反應遲鈍等行為和體征變化，符合絡氣郁滯證候臨床表現(xiàn)。與正常對照組比較，絡氣虛滯/郁滯組生物學表征評分顯著增加（P＜0.05，0.01），絡氣虛滯大鼠末次游泳時間較第一次顯著縮短（P＜0.01），絡氣郁滯組大鼠尾懸掛不動時間明顯延長，掙扎次數(shù)明顯減少，具有統(tǒng)計學差異(均P＜0.01)。
　　 2.2絡氣虛滯/郁滯證候大鼠血漿酰肉堿代謝輪廓及通絡干預研究
　　 多變量分析顯示：絡氣虛滯與絡氣郁滯大鼠模型

15、均可導致血漿酰肉堿代謝輪廓的明顯改變。單變量分析顯示：①與正常對照組比較，絡氣虛滯組大鼠血漿共有11個酰肉堿濃度發(fā)生顯著性變化，其中4個酰肉堿濃度呈顯著性升高（包括C0、Iso-C4、C5:1及C20:1酰肉堿），7個酰肉堿濃度呈顯著性降低（包括C2、C8:1、C10:2、C4-OH、C5-OH、C14-OH及C16-OH酰肉堿），P＜0.05，0.01。②與正常對照組比較，絡氣郁滯組大鼠血漿共有20個酰肉堿的濃度發(fā)生顯著性的變化，其中

16、19個酰肉堿濃度呈顯著性升高（包括C10:1、C12、C14、C14-OH、C14:1、C14:2、C16、C16-OH、C16:1、C16:1-OH、C16:2、C18、C18:1、C18:1-OH、C18:2、C18:2-OH、C20:0、C20:1及C20:2酰肉堿），1個酰肉堿濃度呈顯著性降低(C5-OH)，P＜0.05，0.01。③與絡氣郁滯組比較，絡氣虛滯組大鼠血漿共有23個酰肉堿的濃度發(fā)生顯著性變化，其中2個酰肉堿濃度顯著

17、性升高（包括C0、C5:1酰肉堿），21個酰肉堿濃度顯著性降低(C4-OH、C5-OH、C8:1、C10:1、C10:2、C12、C14、C14-OH、C14:1、C16、C16-OH、C16:1、C16:1-OH、C16:2、C18、C18:1、C18:1-OH、C18:2、C18:2-OH、C20:0及C20:2酰肉堿）P＜0.05，0.01。
　　 多變量分析顯示：人參組與絡氣虛滯組聚集性較強，且與正常對照組呈現(xiàn)出明顯的分

18、離趨勢，表明人參干預的絡氣虛滯大鼠模型血漿酰肉堿代謝輪廓未恢復到正常對照組水平。薤白組則與正常對照組聚集性較強，而與絡氣郁滯組呈現(xiàn)出明顯的分離趨勢，表明薤白干預的絡氣郁滯大鼠模型血漿酰肉堿代謝輪廓恢復到正常對照組水平。單變量分析：①與正常對照組比較，絡氣虛滯大鼠血漿中呈顯著性變化的酰肉堿中，有3個(C0、Iso-C4及C5:1酰肉堿)經(jīng)人參干預后調(diào)節(jié)至正常水平(P＞0.05)。與絡氣虛滯組比較，人參干預后其余酰肉堿有上調(diào)和下調(diào)趨勢，但均

19、無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。②與正常對照組比較，絡氣郁滯大鼠血漿中呈顯著性變化的酰肉堿中，除了C18:2、C20:2、C5-OH及C18:2-OH等4個酰肉堿，其余16個酰肉堿分子經(jīng)薤白干預后均調(diào)節(jié)至正常組水平（P＞0.05）；與絡氣郁滯組比較，薤白組大鼠血漿中有18個酰肉堿濃度發(fā)生顯著性下調(diào)（P＜0.05）；2個酰肉堿（C18和C5-OH）濃度無明顯變化(P＞0.05)。
　　 2.3絡氣虛滯/郁滯證候大鼠血漿脂類代謝輪廓及

20、通絡干預研究
　　 多變量分析：絡氣虛滯、絡氣郁滯大鼠模型均可導致血漿脂類代謝輪廓的明顯改變。單變量分析：①與正常對照組比較，絡氣虛滯組大鼠血漿共有31個脂類濃度發(fā)生顯著性變化，其中僅有2個LPC分子[LPC(18:1)和LPC(18:2)]呈顯著性升高(P＜0.05，0.01)，1個LPC分子[LPC(20:4)]、1個LPE分子[LPE(22:6)]、6個磷脂酸膽堿（具有降脂作用）[PC(32:0)、PC(36:4)、PC(

21、38:4)、PC(38:5)、PC(38:6)和PC(40:6)]及21個TG分子[TG(50:1)、TG(50:2)、TG(50:3)、TG(52:2)、TG(52:4)、TG(52:5)、TG.(54:3)、TG(54:4)、TG(54:5)、TG(54:6)、TG(54:7)、TG(56:6)、TG(56:7)、TG(56:8)、TG(56:9)、TG(58:8)、TG(58:9)、TG(58:10)、TG(58:11)、TG(6

22、0:12)和TG(60:13)]均呈顯著性降低（均P＜0.01）。②與正常對照組比較，絡氣郁滯組大鼠血漿共有10個脂類分子的濃度發(fā)生顯著性的變化，其中3個LPC分子[LPC(18:1)、LPC(18:2)和LPC(O-16:2)]呈顯著性升高(P＜0.05,0.01),5個PC分子[PC(36:4)、PC(38:4)、PC(38:5)、PC(38:6)和PC(40:6)]及2個TG分子[TG(60:12)和TG(62:14)]呈顯著性降

23、低(P＜0.05，0.01)。
　　 多變量分析：通絡干預研究顯示，人參組與絡氣虛滯組聚集性較強，且與正常對照組呈現(xiàn)出明顯的分離趨勢，表明人參干預的絡氣虛滯大鼠模型血漿脂類代謝輪廓未恢復到正常對照組水平。薤白組則與正常對照組聚集性較強，而與絡氣郁滯組呈現(xiàn)出明顯的分離趨勢，表明薤白干預的絡氣郁滯大鼠模型血漿脂類代謝輪廓恢復到正常對照組水平。單變量分析：①與正常對照組比較，絡氣虛滯大鼠血漿中呈顯著性變化的脂類中有4個脂類分子[PC(

24、38:5)、PC(38:6)、PC(40:6)及TG(60:12)]經(jīng)人參干預后濃度調(diào)節(jié)至正常組的水平(P＞0.05)；與絡氣虛滯組比較，人參組大鼠血漿中有25個脂類分子濃度發(fā)生上調(diào)，其中有5個[PC(36:4)、PC(38:4)、PC(38:6)、PC(40:6)、TG(58:11)]具有顯著統(tǒng)計學差異（P＜0.05，0.01）；12個脂類分子[TG(50:1)、TG(52:2)、TG(52:4)、TG(52:5)、TG(54:6)、

25、TG(54:7)、TG(56:7)、TG(56:8)、TG(56:9)、TG(58:9)、TG(58:10)、TG(60:13)]濃度發(fā)生上調(diào)但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。②與正常對照組比較，絡氣郁滯大鼠血漿中呈顯著性變化的脂類中，除PC(38:6)，將其余9個脂類分子濃度均調(diào)節(jié)至正常組水平(P＞0.05)；與絡氣郁滯組比較，薤白組大鼠血漿中有5個脂類分子[PC(36:4)、PC(38:4)、PC(38:5)、PC(38:6)、PC(

26、40:6)]濃度發(fā)生顯著性上調(diào)(P＜0.05，0.01)；1個脂類分子濃度發(fā)生顯著性下調(diào)(LPC18:1)(P＜0.05)。
　　 3 絡氣虛滯/郁滯證候大鼠血管內(nèi)皮結構功能與主動脈、心腦組織CPT-I、磷脂、5-HT受體變化及通絡干預研究
　　 3.1絡氣虛滯/郁滯證候大鼠血管內(nèi)皮結構功能變化及通絡干預研究
　　 絡氣虛滯/郁滯模型組光鏡HE染色顯示：內(nèi)皮細胞腫脹，內(nèi)膜增生，可見炎細胞浸潤，內(nèi)彈力膜可見斷裂，內(nèi)

27、膜下腫脹，炎細胞浸潤，血管壁層次清晰，可見內(nèi)彈性膜及中膜彈性纖維；掃描電鏡顯示：內(nèi)皮細胞界限消失，細胞腫脹脫落，皺褶消失；透射電鏡顯示：核周隙擴張腫脹，細胞器減少，細胞核周可見空泡，核膜模糊不清。與正常對照組比較，絡氣虛滯/郁滯組大鼠血清ET-1水平顯著升高(P＜0.05，0.01)，血漿NO水平顯著降低（均P＜0.05）。
　　 絡氣虛滯/郁滯模型組經(jīng)人參、薤白及通心絡干預后一般狀況明顯改善，與絡氣虛滯/郁滯組比較，各通絡干預

28、組生物學表征評分顯著下降(P＜0.05，0.01)；與絡氣虛滯組第14d力竭游泳時間比較，人參、通心絡組均不同程度延長絡氣虛滯證候大鼠力竭游泳時間（均P＜0.05）。與絡氣郁滯組比較，薤白組、通心絡組大鼠尾懸掛不動時間顯著縮短，掙扎次數(shù)顯著增加，均具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05，0.01)。光鏡、電鏡結果顯示各治療組血管內(nèi)皮結構改善，總體評價通心絡組保護作用優(yōu)于單味通絡藥物組。與絡氣虛滯/郁滯組比較，通絡干預各組大鼠血清ET-1水平顯著降

29、低，血漿NO水平顯著升高，具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05，0.01)。
　　 3.2絡氣虛滯/郁滯大鼠主動脈、心肌CPT-I變化及通絡干預研究
　　 與正常對照組比較絡氣虛滯組心肌組織能量負荷有增高趨勢，但無顯著性統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。與正常對照組、絡氣郁滯組比較，絡氣虛滯組大鼠主動脈、心肌CPT-I、AMPKa、PPARδmRNA表達顯著降低（均P＜0.01），主動脈、心肌CPT-I、AMPKα、pAMPKa、PP

30、AR6蛋白表達顯著下調(diào)；與正常對照組比較，絡氣郁滯組上述指標無顯著變化。
　　 與絡氣虛滯組比較，人參組和通心絡組能量負荷顯著增加（均P＜0.01)，主動脈、心肌CPT-I、AMPKα、PPARδmRNA表達顯著增加，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，0.01）。人參組大鼠主動脈、心肌中CPT-I、AMPKα、pAMPKa蛋白表達顯著上調(diào)；通心絡組大鼠主動脈、心肌CPTI、AMPKα、pAMPKa、PPAR6蛋白表達顯著上調(diào)。與絡氣

31、郁滯組比較，薤白組、通心絡組上述指標無顯著變化。3.3絡氣虛滯/郁滯大鼠主動脈磷脂代謝相關因子變化及通絡藥物干預研究
　　 與正常對照組比較，絡氣虛滯/郁滯證候組主動脈Lp-PLA2含量顯著提高(均P＜0.01)，與正常對照組，絡氣虛滯組大鼠主動脈GPR4mRNA表達顯著上調(diào)（P＜0.01），蛋白表達亦顯著上調(diào)，絡氣郁滯組GPR4mRNA和蛋白表達無顯著變化。
　　 與絡氣虛滯/郁滯組比較，各通絡干預組顯著降低Lp-PL

32、A2含量(P＜0.05，0.01)。與絡氣虛滯組比較，人參組、通心絡組大鼠主動脈GPR4mRNA表達顯著降低(P＜0.01)，蛋白表達亦顯著下調(diào)。
　　 3.4絡氣虛滯/郁滯大鼠主動脈、腦組織5-HT受體變化及通絡干預研究
　　 ①與正常對照組比較，絡氣虛滯組大鼠腦組織5-HT含量顯著增加(P＜0.01)，絡氣郁滯組大鼠5-HT含量有降低趨勢，但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。②與正常對照組比較，絡氣虛滯組、絡氣郁滯組大鼠

33、主動脈5-HT1p受體mRNA表達顯著降低，5-HT2A受體mRNA表達顯著升高，具有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01）③與正常對照組比較，絡氣虛滯組大鼠腦組織5-HT1D受體、5-HT2A受體TPHmRNA無顯著性變化（均P＞0.05），與正常對照組、絡氣虛滯組比較，絡氣郁滯組大鼠腦組織5-HT1D受體、TPH表達顯著降低，5-HT2A受體mRNA表達顯著增加，具有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01）。④與正常對照組比較，絡氣虛滯/郁滯組大鼠血管組

34、織5-HT1D受體蛋白表達顯著下調(diào)，5-HT2A受體蛋白表達顯著上調(diào)。⑤與正常對照組比較，絡氣虛滯組腦組織中5-HT1D受體表達上調(diào)，絡氣郁滯組腦組織中5-HT2A受體蛋白表達顯著上調(diào)。
　　 ①應用人參、薤白和通心絡進行干預后，絡氣虛滯大鼠腦組織中5-HT含量有增加趨勢，絡氣郁滯大鼠5-HT含量有降低趨勢，但均無統(tǒng)計學差異（均P＞0.05）。②與絡氣虛滯/郁滯組比較，通絡干預各組大鼠主動脈5-HT1D受體mRNA表達顯著增加，

35、5-HT2A受體mRNA表達顯著降低，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，0.01)，人參組和通心絡、薤白和通心絡組間無統(tǒng)計學差異（均P＞0.05）。③與絡氣郁滯組比較，薤白組、通心絡組大鼠腦組織5-HT1D受體mRNA表達顯著增加，具有統(tǒng)計學意義(均P＜0.05)，5-HT2A受體mRNA表達顯著降低，具有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01）。薤白組和通心絡組間無統(tǒng)計學差異（均P＞0.05）。④人參、薤白、通心絡干預后可顯著主動脈上調(diào)5-HT1D受

36、體蛋白表達，下調(diào)5-HT2A受體蛋白表達。⑤人參、通心絡干預后可顯著提高腦組織5-HT1D受體蛋白表達；通心絡干預后可顯著下調(diào)絡氣郁滯組5-HT2A受體表達。
　　 結論：
　　 1 首次以脈絡學說為指導，采用代謝組學方法探討絡氣虛滯/郁滯證候亞健康人群和模型大鼠病生理學基礎，為揭示過勞、抑郁等社會心理行為因素在血管病變發(fā)病中的始動作用提供了新的研究思路
　　 本研究以脈絡學說核心理論營衛(wèi)承制調(diào)平和氣血相關理論為

37、指導，基于3469例血管病變患者臨床調(diào)查揭示的絡氣虛滯/郁滯為“脈絡-血管系統(tǒng)病的始動因素并貫穿病變?nèi)^程，以西醫(yī)診斷無明顯病變但具備絡氣虛滯/郁滯證候判定標準的亞健康人群和模擬絡氣虛滯/郁滯證候表現(xiàn)建立的大鼠模型為研究對象，采用代謝組學方法研究這兩類證候的病生理學基礎，為揭示過度疲勞、情緒刺激等社會心理行為因素在血管病變發(fā)病中的始動作用提供了新的研究思路。
　　 2 通過代謝組學和代謝輪廓分析，初步揭示了絡氣虛滯/郁滯證候人群

38、血漿代謝物譜特征和證候大鼠酰肉堿、脂類代謝物譜特征，為社會心理行為因素所致亞健康人群的早期篩查提供代謝組學實驗依據(jù)
　　 絡氣虛滯和絡氣郁滯證候人群血漿代謝物譜均發(fā)生變化，提示兩類證候具有其代謝物質(zhì)基礎，同時兩證候間代謝物譜亦存在差異，其中前者表現(xiàn)為氨基酸代謝（苯丙氨酸、色氨酸略增加）和脂代謝異常（多個LPC顯著降低）；后者則表現(xiàn)為氨基酸代謝（色氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸顯著增加）、脂代謝(LPC顯著降低)及能量代謝（乙酰肉堿略增加

39、）和血紅素氧合酶降解途徑（膽紅素增加）的變化，佐證了脈絡學說指導下辨證分型的科學性。研究結果顯示色氨酸、苯丙氨酸可能是預測過度疲勞、情緒抑郁亞健康人群發(fā)生高血壓的重要代謝標記物，LPC則可能是預測高脂血癥、動脈粥樣硬化及血管內(nèi)皮功能障礙病理損傷的重要代謝標記物。
　　 絡氣虛滯和郁滯證候大鼠血漿酰肉堿和脂類代謝均發(fā)生異常變化，前者以酰肉堿和脂類濃度降低為主，可能與介導能量代謝過程中線粒體脂肪酸β氧化過程限速反應的CPT-I不足和

40、脂肪動員造成脂質(zhì)過度消耗有關；后者以酰肉堿濃度升高和LPC升高為主，可能是長鏈?；鈮A堆積導致代謝毒性損傷和LPC介導的血管內(nèi)皮功能障礙的重要機制之一。此外PC(36:4)、PC(38:6)、PC(40:6)降低有可能是預測絡氣虛滯/郁滯亞健康狀態(tài)下發(fā)展為高脂血癥的重要代謝標記物。
　　 3 揭示了絡氣虛滯/郁滯證候均可導致血管內(nèi)皮結構功能損傷，并可引發(fā)心肌能量代謝和腦組織5-HT及其受體調(diào)節(jié)異常
　　 圍繞代謝組學研究

41、結果，從能量、磷脂、色氨酸代謝相關細胞因子和受體表達，探討證候因素對血管、心肌、腦組織的影響，證實過度疲勞和情緒刺激所致絡氣虛滯/郁滯證候均可引起血管內(nèi)皮結構與功能損傷，可能與CPT-ImRNA和蛋白表達降低、調(diào)控LPC生成的Lp-PLA2水平升高及介導舒張/收縮血管作用的5-HT1D/5-HT2A受體表達下調(diào)/上調(diào)有關；可引起絡氣虛滯證候大鼠心肌能量代謝障礙，可能與AMPKa及其磷酸化、PPARδ通路抑制導致CPT-ImRNA和蛋白表

42、達降低有關，其中心肌能量負荷代償性增加，成為營衛(wèi)承制調(diào)平“制”的代償性調(diào)節(jié)具體體現(xiàn)；此外腦組織中5-HT水平增加/降低及其受體表達異常，可能是絡氣虛滯/郁滯證候誘發(fā)高血壓，出現(xiàn)中樞疲勞和心境抑郁的重要發(fā)病機制之一。
　　 4 通絡干預可有效的調(diào)節(jié)絡氣虛滯/郁滯證候代謝物譜、主動脈、心肌及腦組織病理改變，體現(xiàn)了通絡干預病證法藥關聯(lián)性的科學內(nèi)涵，亦反映出復方通絡藥物整體調(diào)節(jié)的系統(tǒng)效應，實現(xiàn)由“調(diào)”至“平”的自穩(wěn)態(tài)
　　 針對

43、絡氣虛滯/郁滯證候分別選用益氣通絡的人參和流氣暢絡的薤白及脈絡學說指導下通絡代表性藥物通心絡進行干預，其中人參和薤白均可不同程度的調(diào)節(jié)絡氣虛滯/郁滯證候狀態(tài)下機體血漿酰肉堿和脂類代謝紊亂。各通絡藥物均可有效保護血管內(nèi)皮結構與功能完整性，通絡干預可能通過進一步提高CPT-I的表達，增加絡氣虛滯證候大鼠心肌能量負荷，激活主動脈和心肌AMPK及其磷酸化與PPARδ通路增加CPT-I的表達，從而改善組織能量代謝；可能通過降低主動脈Lp-PLA2

44、水平和GPR4mRNA及蛋白表達，抑制LPC介導的血管內(nèi)皮功能障礙；同時可調(diào)節(jié)主動脈、腦組織中5-HT1D和5-HT2A受體的表達及腦組織中5-HT含量。
　　 5 基于臨床和實驗代謝組學研究結果，提出“超前干預、辨證施調(diào)”的血管病變早期干預策略
　　 本研究通過證候人群和動物實驗，初步揭示了絡氣虛滯/郁滯證候的代謝組學特征及其對血管、心腦重要臟器的影響，提示過度疲勞、情緒抑郁等社會心理行為因素是血管病變發(fā)病的重要始動因