葡多酚對(duì)乳腺癌細(xì)胞的抑制作用與調(diào)控受體的研究.pdf

1、目的：探討葡多酚(grape procyanidins，GPC)對(duì)乳腺癌細(xì)胞的抑制作用和雌激素受體(estrogen receptor，ER)對(duì)GPC抑制乳腺癌細(xì)胞增殖的調(diào)控作用。 方法:實(shí)驗(yàn)一：將GPC和乳腺癌MCF-7細(xì)胞共同培養(yǎng)，設(shè)1個(gè)腫瘤對(duì)照組(GPC終濃度為0μg/mL)和5個(gè)GPC劑量組(GPC終濃度分別為10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL和200μg/mL)，在6h、12h、24h、

2、48h和72h不同作用時(shí)間點(diǎn)，用MTT法測(cè)定各組乳腺癌細(xì)胞的增殖活性。 實(shí)驗(yàn)二：設(shè)1個(gè)腫瘤對(duì)照組(GPC終濃度為0μg/mL)和3個(gè)GPC劑量組(GPC終濃度分別為50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL)，將GPC和MCF-7細(xì)胞共同培養(yǎng)24h后，用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)各組乳腺癌細(xì)胞增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)、Bcl-2、Bax和ER蛋白的表達(dá)水平。

3、 實(shí)驗(yàn)三：將GPC和雌激素受體阻斷劑ICI182.780(簡(jiǎn)稱ICI)與乳腺癌MCF-7細(xì)胞共同培養(yǎng)，設(shè)4個(gè)實(shí)驗(yàn)組：腫瘤對(duì)照組(不給予GPC和ICI)、ICI對(duì)照組(ICI10-6mol/L)、GPC劑量組(GPC 200μg/mL)、GPC+ICI組(GPC 200μg/mL和ICI10-6mol/L)，培養(yǎng)24h后，用MTT法測(cè)定各組乳腺癌細(xì)胞的增殖活性，用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)各組乳腺癌細(xì)胞PCNA、Bcl-2和Bax蛋白的表

4、達(dá)水平。 結(jié)果:實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞增殖活性測(cè)定結(jié)果顯示，在同一作用時(shí)間點(diǎn)，隨著GPC劑量的增加，10、50、100、150、200μg/mLGPC組的乳腺癌細(xì)胞增殖活性水平依次降低(P<0.05)。隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，100、150、200μg/mLGPC組的乳腺癌細(xì)胞增殖活性水平逐漸降低(P<0.05)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明GPC對(duì)乳腺癌細(xì)胞的增殖活性有抑制作用，并且這種抑制作用隨GPC劑量的增加而增大，隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯，因此具有

5、一定的劑量效應(yīng)關(guān)系和時(shí)間效應(yīng)關(guān)系。 實(shí)驗(yàn)二： ①PCNA表達(dá)結(jié)果顯示，與腫瘤對(duì)照組的PCNA陽性表達(dá)率(77.10±6.23)％相比較，50、100、200μg/mLGPC組的陽性表達(dá)率(70.32±5.80)％、(47.82±7.83)％和(28.6±6.75)％均顯著性降低(P<0.05)，且3個(gè)GPC劑量組之間比較亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 ②Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)結(jié)果顯示，腫瘤對(duì)照組的Bcl-2

6、陽性表達(dá)率高、Bax陽性表達(dá)率低，200μg/mLGPC組的Bcl-2陽性表達(dá)率低、Bax陽性表達(dá)率高，兩組之間的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 ③ER蛋白表達(dá)結(jié)果顯示，100、20μg/mLGPC組ER蛋白陽性表達(dá)率分別為(86.22±5.86)％和(79.34±4.79)％，與腫瘤對(duì)照組ER蛋白陽性表達(dá)率(93.90±6.07)％比較均顯著性降低(P<0.05)，且兩組之間的差別亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

7、實(shí)驗(yàn)三： ①細(xì)胞增殖活性的測(cè)定結(jié)果顯示，腫瘤對(duì)照組的細(xì)胞增殖活性為0.373±0.009，ICI對(duì)照組和GPC劑量組的細(xì)胞增殖活性水平分別為0.346±0.015、0.234±0.011，均較腫瘤對(duì)照組顯著性降低(p<0.05)。GPC+ICI組的細(xì)胞增殖活性水平為0.293±0.008，較GPC劑量組顯著性升高0.059(P<0.05)，較ICI對(duì)照組顯著性降低0.053(P<0.05)。 ②與腫瘤對(duì)照組比較，ICI對(duì)

8、照組和GPC劑量組的PCNA陽性表達(dá)率均顯著性降低(P<0.05)。GPC+ICI組的PCNA陽性表達(dá)率較GPC劑量組顯著性升高(P<0.05)，較ICI對(duì)照組顯著性降低(P<0.05)。 ③GPC+ICI組的Bcl-2陽性表達(dá)率較GPC劑量組顯著性升高(P<0.05)，而Bax蛋白陽性表達(dá)率較GPC劑量組顯著性降低(p<0.05)。 結(jié)論:1 GPC可以有效地抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖，促進(jìn)其凋亡。 2.ER對(duì)GPC