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文檔簡(jiǎn)介
1、第一部分:
目的:探討 P53在隱睪所致生精細(xì)胞凋亡過程中的作用及其與 Bcl-2/Bax的關(guān)系。
方法:將42日齡雄性SD大鼠32只隨機(jī)分為假手術(shù)組、隱睪+p53抑制劑(p-fifty three inhibitor-alpha,PFT-α)組、隱睪+PFT-α溶媒組、隱睪組。麻醉后下腹正中切口,隱睪組建立單側(cè)隱睪模型,模型建立按文獻(xiàn)操作,大鼠切斷右側(cè)睪丸引帶,將右側(cè)睪丸固定于腹后壁后關(guān)腹,術(shù)后未注射任何藥物;隱睪
2、+PFT-α組和隱睪+溶媒組大鼠右側(cè)睪丸手術(shù)處理方法同隱睪組,術(shù)后分別腹腔內(nèi)注射PFT-α和溶媒;假手術(shù)組將右側(cè)睪丸切斷引帶后還納入陰囊關(guān)腹。第7天脫頸椎處死大鼠,留取各組大鼠雙側(cè)睪丸稱濕重,常規(guī)組織學(xué)觀察各組右側(cè)睪丸生精上皮形態(tài),TUNEL原位末端標(biāo)記法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)各組右側(cè)睪丸生精細(xì)胞凋亡程度, Western blot和免疫組化分別檢測(cè)右側(cè)睪丸 P53、Bcl-2/Bax蛋白表達(dá)的變化。
結(jié)果:除假手術(shù)組外
3、,其余各組右側(cè)睪丸重量均輕于左側(cè)睪丸;隱睪組和隱睪+溶媒組右側(cè)睪丸重量明顯輕于其它組右側(cè)睪丸;隱睪+PFT-α組隱睪重量大于隱睪組及隱睪+溶媒組;隱睪組和隱睪+溶媒組之間各檢測(cè)指標(biāo)差異無顯著性意義。凋亡指數(shù)(AI)在隱睪組和隱睪+溶媒組最高,假手術(shù)組最低;隱睪+PFT-α組中低于隱睪+溶媒組,差別均有顯著性意義。Western blot和免疫組化顯示P53和Bax蛋白在假手術(shù)組睪丸中表達(dá)最低,隱睪組和隱睪+溶媒組中表達(dá)最高,在隱睪+PF
4、T-α組中低于隱睪+溶媒組;Bcl-2蛋白在假手術(shù)組睪丸中含量最高,隱睪組和隱睪+溶媒組中含量最低,在隱睪+ PFT-α組中高于隱睪+溶媒組,差別均有顯著性意義。
結(jié)論:1.實(shí)驗(yàn)性隱睪生精細(xì)胞凋亡過程中P53表達(dá)增加;
2. PFT-α通過上調(diào)Bcl-2、下調(diào)Bax的表達(dá),抑制實(shí)驗(yàn)性隱睪所致的生精細(xì)胞過度凋亡;
第二部分:
目的:通過觀察氨基胍對(duì)隱睪生精細(xì)胞凋亡過程中 P53表達(dá)的影響,探討生精細(xì)
5、胞凋亡過程中NO與P53的關(guān)系。
方法:將42日齡雄性 SD大鼠32只隨機(jī)分為假手術(shù)組、隱睪+氨基胍(Aminoguanidine,AG,iNOS抑制劑)組、隱睪+NS(AG溶媒)組和隱睪組。麻醉后下腹正中切口,建立單側(cè)隱睪模型,模型建立按文獻(xiàn)操作[10],隱睪組大鼠切斷右側(cè)睪丸引帶,將右側(cè)睪丸固定于腹后壁后關(guān)腹,術(shù)后未注射任何藥物;隱睪+AG組、隱睪+NS組大鼠右側(cè)睪丸手術(shù)處理方法同隱睪組大鼠,術(shù)后分別腹腔內(nèi)注射 AG、NS
6、;假手術(shù)組將右側(cè)睪丸切斷引帶后還納入陰囊關(guān)腹。術(shù)后第7天給藥后頸動(dòng)脈采血,取血清于-20℃凍存,用于硝酸還原酶法測(cè)定血清 NO含量,化學(xué)比色法測(cè)血清NOS活性。脫頸椎處死大鼠,留取各組大鼠雙側(cè)睪丸稱濕重,常規(guī)組織學(xué)觀察各組右側(cè)睪丸生精上皮形態(tài),TUNEL原位末端標(biāo)記法結(jié)合FCM檢測(cè)各組右側(cè)睪丸生精細(xì)胞凋亡,Western blot和免疫組化分別檢測(cè)右側(cè)睪丸P53和iNOS蛋白表達(dá)的變化。
結(jié)果:除假手術(shù)組外,其余各組右側(cè)睪丸重
7、量均輕于左側(cè)睪丸;隱睪組和隱睪+NS組右側(cè)睪丸重量明顯輕于其它各組右側(cè)睪丸;隱睪+AG組隱睪重量明顯大于隱睪組及隱睪+NS組。血清 NO含量和NOS活性在隱睪組和隱睪+NS組最高,隱睪+AG組次之,假手術(shù)組最低。亞倍體生精細(xì)胞百分比和凋亡指數(shù)(AI)在隱睪組和隱睪+NS組最高,假手術(shù)組最低;在隱睪+AG組中低于隱睪+NS組,差別均有顯著性意義。Western blot和免疫組化顯示P53蛋白在假手術(shù)組睪丸中表達(dá)最低,隱睪組和隱睪+NS組
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