改良細胞因子雞尾酒法對樹突狀細胞誘導的研究.pdf

1、目的:探討優(yōu)化人γhG-CSF動員的外周血采集物來源的樹突狀細胞(dendriticcell,DC)成熟誘導條件,以便制備更有效的DC疫苗應用于臨床,觀察并比較不同誘導條件下制備的DC疫苗在體外特異性抗腫瘤免疫反應的能力。
　　方法:利用密度梯度離心法從重組人粒細胞集落刺激因子(γhG-CSF)動員的外周血采集物分離出單個核細胞,以重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(γhGM-CSF)和重組人白細胞介素-4(γhIL-4)體外誘導

2、成不成熟樹突狀細胞(imDC),分別采用傳統(tǒng)細胞因子雞尾酒(IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2)和改良細胞因子雞尾酒(IL-1β、IL-6、TNF-α、polyI:C、CpGODN)刺激成熟,并設有對照組(只加IL-4、GM-CSF)。3d后收獲成熟DC,觀察細胞形態(tài)、流式細胞儀檢測DC的內(nèi)吞能力通過異硫氰酸熒光素標記的葡聚糖(FITC-Dextran)、檢測DC表面CD83、CD1a、CD80、HLA-DR、CD86和CCR-

3、7,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測其IL-12、IL-10的分泌,MTT法檢測其刺激淋巴細胞增殖能力。實驗中三組DC分別轉染A549細胞的總RNA,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測IFN-γ的分泌,乳酸脫氫酶(LDH)釋放法測定殺傷腫瘤活性。
　　結果:傳統(tǒng)細胞因子雞尾酒(IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2)和改良細胞因子雞尾酒(IL-1β、IL-6、TNF-α、polyI:C、CpGODN)兩種方法均能誘導DC成熟,以

4、改良細胞因子雞尾酒效果更佳,對照組幾乎不誘導DC成熟。改良雞尾酒方法誘導的成熟DC的FITC-Dextran內(nèi)吞能力明顯下降;DC成熟的表面標志物CD83、CD1a的表達率分別是84.44％、87.94%(P<0.05);IL-12分泌量明顯增高(P<0.05);IL-10分泌量明顯增高(P<0.05);成熟DC能有效的刺激T淋巴細胞增殖;轉染A549細胞的總RNA后的改良組DC的IFN-γ分泌水平明顯高于前兩組(P<0.05),并能誘