消瘀化痰飲對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠肝組織PPARαmRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：消瘀化痰飲(由丹參、郁金、澤瀉、制半夏、海藻、柴胡、決明子、生大黃、生黃芪、炒白術(shù)等組成)具有消瘀化痰、疏肝健脾的功效，為導(dǎo)師臨床觀察篩選的效方，對(duì)非酒精性脂肪肝(NAFLD)具有較好的治療效果，為了進(jìn)一步探討其作用機(jī)理，參照相關(guān)文獻(xiàn)運(yùn)用高脂飼料喂飼大鼠復(fù)制NAFLD模型，同時(shí)施加藥物干預(yù)，觀察了其對(duì)NAFLD大鼠脂質(zhì)代謝、肝功能及肝組織PPARαmRNA表達(dá)的影響，探討了其促進(jìn)脂質(zhì)代謝、保護(hù)肝功能和增強(qiáng)PPARαmRNA表達(dá)的作

2、用機(jī)制，并運(yùn)用光鏡和電鏡觀察了本方對(duì)肝組織形態(tài)學(xué)的影響。 方法: 第一部分消瘀化痰飲對(duì)NAFLD大鼠脂質(zhì)代謝和肝組織形態(tài)學(xué)的影響選用SD大鼠50只，體重160～180g，雄性。大鼠自由飲水進(jìn)食，飼養(yǎng)于18℃～22℃明暗各12小時(shí)的清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。正常喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組(簡(jiǎn)稱正常組，normal control group，N)、模型對(duì)照組(簡(jiǎn)稱模型組，model group，M)、消瘀化痰飲高劑量組

3、(簡(jiǎn)稱高劑量組，high-dose xiaoyuhuatanyin group，H)、消瘀化痰飲低劑量組(簡(jiǎn)稱低劑量組，low-dose xiaoyuhuatanyin groupgroup，L)、陽(yáng)性藥(東寶甘泰)對(duì)照組(簡(jiǎn)稱對(duì)照組，dongbaoganmi control group，D)。計(jì)算。除正常組喂飼普通飼料外，其余各組均喂飼高脂飼料。同時(shí)，各治療組灌服治療藥或?qū)φ账?，正常組與模型組灌服等量生理鹽水，每天上午灌胃1次，持續(xù)灌

4、胃8周，每次用藥體積均按1ml/100g計(jì)算。9周末，于最后1次給藥后禁食12h麻醉狀態(tài)下股動(dòng)脈取血，將血樣低溫離心，分離血清，密封，-20℃冷貯備用。于肝臟最大葉距邊緣0.5cm處取0.1×0.1×0.1cm3肝組織浸泡于4％戊二醛中固定，以備電鏡觀察。另取少許肝組織液氮冷凍以備檢測(cè)肝勻漿TG、TC的含量，然后取相同部位肝組織0.5×0.5×0.5cm3置于4％多聚甲醛液中固定，石蠟包埋，切片，HE染色，以備光鏡觀察。第二部分　消瘀化

5、痰飲對(duì)NAFLD大鼠肝組織PPARαmRAN表達(dá)的影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組、用藥情況同前。連續(xù)灌胃8周，確定脂肪肝形成后，于最后1次給藥禁食12h后麻醉動(dòng)物，剖取肝臟，在肝臟最大葉距邊緣0.5cm處取少許肝組織，液氮冷凍以備RT-PCR檢測(cè)PPARαmRAN的表達(dá)。 結(jié)果: 第一部分　消瘀化痰飲對(duì)NAFLD大鼠脂質(zhì)代謝和肝組織形態(tài)學(xué)的影響1 消瘀化痰飲對(duì)NAFLD大鼠血清TG、TC、FFA含量的影響模型組大鼠血清TG、TC、FF

6、A的含量(1.17±0.096、3.27±0.18、480.475±18.94)明顯高于正常組(0.56±0.084、1.45±0.20、225.71±15.98)(P<0.01)，顯示NAFLD大鼠存在著明顯的脂質(zhì)代謝紊亂。經(jīng)用藥干預(yù)，各用藥組均能顯著降低模型大鼠血清TG、TC、FFA的含量，與模型組比較均具有顯著性差異(P<0.01)。其中高劑量組大鼠血清TG、TC、FFA的含量(0.52±0.065、1.44±0.11、221.4

7、3±15.32)和低劑量組的含量(0.57±0.059、1.56±0.13、241.42±16.96)較對(duì)照組的含量(0.76±0.070、2.06±0.28、331.90±16.32)均明顯降低(P<0.01)。而高、低劑量組之間經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無(wú)明顯差異(P>0.05)。 2 消瘀化痰飲對(duì)NAFLD大鼠AST、ALT活性的影響模型組大鼠血清AST、ALT的活性(32.37±2.45、15.84±1.01)明顯高于正常組的活性(26.59

8、±2.33、10.89±0.86)(P<0.01)。經(jīng)用藥干預(yù)，各用藥組大鼠血清AST、ALT的活性均有明顯的下降，與模型組比較，差異有顯著性(P<0.01)。且低劑量組AST的活性(19.45±1.90)較對(duì)照組的活性(23.19±1.78)低(P<0.05)；高劑量組ALT的活性(4.16±0.89)優(yōu)于對(duì)照組的活性(7.32±0.45)(P<0.05)，而高、低劑量組之間AST、ALT的活性經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無(wú)明顯差異(P>0.05)。

9、 3.消瘀化痰飲對(duì)NAFLD大鼠肝臟TG、TC含量的影響模型組大鼠肝臟TG、TC的含量(0.82±0.08、0.44±0.07)明顯高于正常組的含量(0.45±0.05、0.27±0.04)(P<0.01)。經(jīng)用藥干預(yù)，各用藥組均能顯著降低模型大鼠肝組織TG、TC的含量(P<0.01)。且高劑量組TC的含量(0.27±0.04)低于對(duì)照組的含量(0.34±0.05)(P<0.05)，而高、低劑量組TC的含量經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無(wú)明顯差異

10、(P>0.05)；各用藥組TG的含量經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無(wú)明顯差異(P>0.05)。 4 肝臟組織形態(tài)學(xué)改變光鏡可見(jiàn)：正常組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)完整、清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，中央靜脈大而壁薄，肝細(xì)胞排列成肝索，在中央靜脈周圍呈放射狀分布，細(xì)胞呈多邊形。模型組大鼠肝細(xì)胞中度細(xì)胞水腫，少量的肝細(xì)胞壞死，多數(shù)肝細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)大小不等、數(shù)量不一的脂滴空泡(脂肪變性)，重度變性者，脂滴空泡融合，呈現(xiàn)中至重度脂肪變性，但未見(jiàn)明顯的纖維化改變。各治療組動(dòng)物肝小葉

11、和肝血竇結(jié)構(gòu)清晰，高、低劑量組肝細(xì)胞內(nèi)脂滴空泡基本消失，對(duì)照組中少量的肝細(xì)胞內(nèi)仍有脂滴空泡，并有輕度的細(xì)胞水腫。 透射電鏡可見(jiàn)：正常組大鼠肝臟細(xì)胞質(zhì)中線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等基本正常；模型組細(xì)胞質(zhì)內(nèi)充滿了大、小不同的脂滴，線粒體全部脊融合、消失；粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有輕度脫顆?，F(xiàn)象。對(duì)照組細(xì)胞胞漿內(nèi)可見(jiàn)大、小不等脂滴，線粒體腫脹、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有部分?jǐn)嗔熏F(xiàn)象。高、低劑量組上述情況明顯改善，肝細(xì)胞胞漿有少量脂滴，線粒體形態(tài)基本正常，脊數(shù)目明顯增多，僅部

12、分可見(jiàn)輕度腫脹變形，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)基本正常。 第二部分　消淤化痰飲對(duì)NAFLD大鼠肝組織PPAEαmRAN表達(dá)的影響RT-PCR后，瓊脂糖凝膠電泳，在239bp、587bp處分別顯示出PPARα和β-actin電泳帶，與預(yù)期結(jié)果一致。且模型組大鼠肝組織PPARamRNA(0.220±0.020)的表達(dá)顯著低于正常組(0.419±0.023)的表達(dá)(P<0.01)。給藥后，各用藥組肝組織PPARamRNA的表達(dá)顯著高于模型組的表達(dá)(P<0

13、.01)，且高、低劑量組肝組織PPARαmRNA(0.341±0.020、0.351±0.017)的表達(dá)高于對(duì)照組(0.276±0.017)的表達(dá)(P<0.01)，而高、低劑量組之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論: 1.消瘀化痰飲能顯著降低NAFLD大鼠血清和肝組織內(nèi)異常升高的TC、TG、FFA的含量，抑制血清內(nèi)ALT和AST活性的異常升高，呈現(xiàn)出良好的調(diào)脂護(hù)肝作用。 2.消瘀化痰飲可明顯改善NAFLD大鼠