CpGODN對哮喘小鼠TSLP、IL-17表達影響的研究.pdf

1、目的:(1)建立急性支氣管哮喘小鼠模型,觀察胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素(TSLP),在支氣管肺泡灌洗液(BALF)、血清中的表達水平；IL-17在胸腺、脾臟組織中的表達情況。(2)觀察糖皮質(zhì)激素對哮喘小鼠BALF、血清中TSLP表達水平及對脾臟、胸腺組織中IL-17表達的影響。(3)觀察CpGODN對哮喘小鼠BALF、血清中TSLP表達水平及對脾臟、胸腺組織中IL-17表達的影響,探討其免疫調(diào)節(jié)的可能機制。
　　 方法:48只清潔級

2、(SPF)雄性BALB/c小鼠(4-6周)隨機分為4組,正常對照組(A組)、哮喘模型組(B組)、地塞米松干預組(C組)、CpGODN干預組(D組),每組12只。以卵清白蛋白(OVA)致敏和激發(fā)建立小鼠急性哮喘模型。A組致敏和激發(fā)均以生理鹽水替代OVA；B組、C組和D組均用0.1％OVA/AL(OH)3混合凝膠0.1ml于第1、14天腹腔注射(i.p)致敏,第25-31天1％OVA霧化吸入激發(fā),每日一次每次30分鐘,連續(xù)7天[1]。C組激

3、發(fā)前一天和每次激發(fā)前1h,每只小鼠腹腔注射DXM0.5mg/kg；D組激發(fā)前一天和每次激發(fā)前1h,每只小鼠腹腔注射CpGODN50μg/只[2]。各實驗組末次激發(fā)24小時后,摘取眼球,收集血液,頸椎脫臼處死小鼠,收集BALF,留取肺臟、胸腺及脾臟組織。計數(shù)BALF中細胞總數(shù)并分類；光鏡、電鏡觀察肺組織病理變化；酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測BALF、血清中TSLP的表達水平；Western blot檢測胸腺、脾臟組織IL-17蛋白表

4、達。
　　 結(jié)果:(1)BALF中炎癥細胞情況:各組BALF中細胞總數(shù)、EOS絕對值計數(shù)、EOS占細胞總數(shù)的百分比(EOS％)的比較,B組、C組、D組均顯著高于A組(P<0.01),C組、D組BALF中細胞總數(shù)、EOS絕對值計數(shù)、EOS％均顯著低于B組(P<0.01),C組、D組比較無顯著性差異(P>0.05)；淋巴細胞百分比(Lym％)比較,B組、C組和D組顯著高于A組(均P<0.01),D組與B組之間無顯著差異性(P>0.0

5、5),C組顯著于低于B組及D組(P<0.01)。
　　 (2)肺組織病理改變:A組小鼠肺組織切片HE染色顯示,支氣管管腔形態(tài)規(guī)則,管腔內(nèi)無明顯分泌物貯留,粘膜上皮完整、粘膜肌層完好,細支氣管、肺泡隔及血管周圍未見炎癥細胞浸潤,肺泡形態(tài)規(guī)則；B組顯示支氣管收縮,管腔狹窄,支氣管及血管周圍有較多炎性細胞浸潤(以EOS、Lym、Neu為主),粘液分泌明顯增加。粘膜上皮壞死脫落,基底膜露出,支氣管內(nèi)分泌物貯留,并有基底膜增厚和平滑肌肥大

6、增生等表現(xiàn)；C組和D組支氣管和血管周圍可見少量炎性細胞浸潤,黏液分泌明顯減少,支氣管平滑肌無明顯增厚。
　　 (3)肺組織超微結(jié)構(gòu):電鏡下A組顯示正常的肺泡隔和肺泡Ⅱ型上皮細胞,支氣管纖毛上皮細胞纖毛排列整齊；B組顯示肺泡隔明顯增寬,基底膜增厚,炎癥細胞浸潤,肺泡Ⅱ型上皮細胞腫脹,板層小體空泡化,支氣管纖毛上皮細胞纖毛排列稀疏,有斷裂、融合現(xiàn)象；C組與D組肺泡隔和肺泡Ⅱ型上皮細胞基本回復正常,板層小體及線粒體空泡變性現(xiàn)象不明顯,

7、支氣管纖毛上皮細胞纖毛排列尚整齊,肺內(nèi)炎性滲出不明顯,支氣管平滑肌無明顯增厚。
　　 (4)ELISA檢測BALF中TSLP表達水平結(jié)果:C組(2.254±0.118)TSLP表達水平顯著低于A組(2.523±0.293)、B組(2.473±0.146)、D組(2.481±0.180)(均P<0.05)；A組、B組、D組之間TSLP表達水平,兩兩比較無顯著性差異。
　　 (5)ELISA檢測血清TSLP表達水平結(jié)果:A組

8、(2.560±0.096)、B組(2.739±0.127)、C組(3.028±0.142)、D組(3.556±0.102)TSLP表達水平逐漸升高,兩兩比較均有顯著性差異(均P<0.01)。(6)Western Blot檢測胸腺IL-17蛋白表達結(jié)果:A組(1.217±0.045)、B組(1.210±0.039)、C組(1.212±0.046)、D組(1.213±0.039)IL-17蛋白表達水平,兩兩比較均無顯著性差異(均P>0.05

9、)。
　　 (7)Western Blot檢測脾臟IL-17蛋白表達結(jié)果:D組(2.641±0.091)IL-17蛋白表達顯著高于A組(0.316±0.022)、B組(0.320±0.027)、C組(0.122±0.072)(均P<0.01)；C組IL-17蛋白表達顯著低于A組、B組、D組(均P<0.01)；A組、B組之間IL-17蛋白表達無顯著性差異。
　　 結(jié)論:(1)哮喘小鼠BALF中TSLP水平較正常無明顯變化,

10、血清TSLP水平明顯升高。
　　 (2)地塞米松干預可降低哮喘小鼠BALF中TSLP表達水平,改善氣道炎癥。
　　 (3)CpGODN干預使血清TSLP明顯升高,而對BALF中TSLP水平無明顯影響。
　　 (4)血清TSLP升高對哮喘小鼠無明顯影響。
　　 (5)地塞米松、CpGODN干預對對哮喘小鼠胸腺IL-17表達無明顯影響。
　　 (6)地塞米松干預后哮喘小鼠脾臟IL-17表達明顯降低。<