穴位埋藥對腦缺血再灌注大鼠海馬凋亡相關(guān)基因表達的影響.pdf

1、目的： 在針灸治療腦缺血病的基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代藥理學研究基礎(chǔ)制備膠原川芎嗪緩釋劑，研究其在大椎，雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴穴位埋藥對局灶性腦缺血再灌注大鼠海馬區(qū)凋亡相關(guān)因子即促凋亡因子(Fas)和熱休克蛋白70(HSP-70)及凋亡細胞表達的影響。 方法： 選用健康SD大鼠160只，隨機分為6組，正常組10只，假手術(shù)組30只(24h組、72h組、120h組各10只)，模型組30只(24h組、72h組、120h組各10只)，腹腔注射

2、組30只(24h組、72h組、120h組各10只)，電針組30只(24h組、72h組、120h組各10只)，穴位埋藥組30只(24h組、72h組、120h組各10只)．參照大腦中動脈線栓法(MCAO)制成大鼠大腦中動脈閉塞及再灌流模型，以膠原川芎嗪緩釋劑(藥線)在大椎，雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴穴位埋藥。各組于各時相，以10％水合氯醛足量麻醉，以4℃的4％多聚甲醛200ml(含0.1％DEPC)進行心臟灌注，灌畢迅速取腦，在視交叉平面前后2mm處將腦冠

3、狀切面切開，留取中間部分置于4℃的4％多聚甲醛固定液中過夜，并將固定好的腦組織進行石蠟包埋．分別運用免疫組化法(SABC法)和TUNEL，原位標記法檢測缺血側(cè)海馬區(qū)Fas、HSP-70及凋亡細胞的含量變化以及穴位埋藥對上述指標的調(diào)節(jié)作用。采用HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)學圖文分析系統(tǒng)對切片進行圖像分析，結(jié)果進行統(tǒng)計學處理。 結(jié)果： 1.大腦中動脈缺血再灌注可明顯損害大鼠的正常行為活動．三組治療組腦缺血再灌大鼠神經(jīng)系

4、統(tǒng)體征均有明顯改善，與模型組比較有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)，其中穴位埋藥尤能明顯改善大鼠神經(jīng)系統(tǒng)體征(與腹腔注射組比較P<0.01；與電針組比較P<0.05)． 2.免疫組化結(jié)果顯示模型組腦缺血再灌注后缺血側(cè)海馬區(qū)Fas表達顯著增再灌注后24h達高峰；正常組未見Fas蛋白表達；假手術(shù)組僅見極少量Fas蛋白表達；穴位埋藥組各時相組Fas蛋白表達均顯著低于模型組(P<0.05，P<0.01)，其與同時相電針組和腹腔注

5、射組比較差異也較顯著(P<0.05)． 3.免疫組化結(jié)果顯示模型組腦缺血再灌注后24h時缺血側(cè)海馬區(qū)HSP-70陽性細胞數(shù)達到高峰，以后逐漸下降；正常組及假手術(shù)組大鼠海馬僅見少量HSP-70陽性細胞；各治療組大腦海馬HSP-70表達均增加，與同時相模型組比較差異較為顯著(P<0.05，P<0.01)，其中埋藥組大腦海馬HSP-70表達增加最為明顯(與同時相電針組比較(P<0.05)，與同時相腹腔注射組比較P<0.05)．

6、 4.TUNEL原位標記法檢測顯示模型組腦缺血再灌注后凋亡陽性細胞數(shù)目增多，于再灌注后1天達到高峰，以后逐漸下降；正常組及假手術(shù)組大鼠海馬僅見數(shù)個凋亡細胞；埋藥組，電針組，注射組大腦海馬凋亡細胞計數(shù)均少于模型組(P<0.05，P<0.01)，其中埋藥組凋亡細胞減少最明顯(P<0.05)． 結(jié)論： 大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后缺血側(cè)海馬組織中Fas表達增高、凋亡細胞數(shù)量增多，缺血再灌注損傷加重。穴位埋藥可以通過下調(diào)Fas、