玻璃化冷凍技術的實驗研究.pdf

1、第一部分四種冷凍容器對人三原核卵裂期胚胎玻璃化冷凍的影響 目的：觀察開放型拉細麥管、閉合型拉細麥管、冷凍環(huán)和麥管四種冷凍容器對玻璃化凍融胚胎形態(tài)和功能的影響。 結論：Cryoloop對玻璃化凍融胚胎的形態(tài)和功能影響最小，CPS次之，OPS雖未獲得比Straw更高的形態(tài)存活率，但減輕了對胚胎的功能損傷。 第二部分氯化膽堿替代氯化鈉的磷酸鹽緩沖液和非滲透性冷凍保護劑海藻糖對胚胎玻璃化冷凍的影響 目的：觀察低N

2、a+磷酸鹽緩沖液(mPBS)和非滲透性冷凍保護劑海藻糖(Trehalose)對胚胎玻璃化冷凍的影響。 結論： 1、低Na+磷酸鹽緩沖液對玻璃化冷凍胚胎的功能影響小，更適于玻璃化冷凍胚胎。 2、D-(+)Trehalose與Sucrose相比，未能顯著增加凍融胚胎的存活率，亦未明顯減輕對胚胎功能的影響。 第三部分玻璃化冷凍胚胎的退化機制研究 目的：探討玻璃化冷凍胚胎的退化機制。 結論：LSC

3、M檢測到了玻璃化冷凍胚胎的△Ψm下降，而TUNEL法在玻璃化凍融胚胎中檢測到了DNA裂解片斷的存在，結合形態(tài)學觀察，證實了玻璃化冷凍胚胎通過細胞凋亡途徑退化。 第四部分激光掃描共聚焦顯微鏡結合免疫細胞化學染色技術在玻璃化冷凍小鼠卵母細胞中的研究應用 目的：建立一種觀察成熟卵母細胞紡錘體和染色體的方法，并用于觀察OPS玻璃化冷凍成熟(MⅡ期)卵母細胞的紡錘體和染色體變化 結論： 1、LSCM結合細胞免疫化學