實驗性糖尿病大鼠的肺組織AGEs、CTGF、TGF-β1免疫組織化學觀察及圖像分析.pdf

1、目的：糖尿病(DM)是多種因素引起的以慢性高血糖為特征的代謝紊亂，可導致全身多系統(tǒng)損害的一組臨床綜合征。長期以來，人們對DM心臟、腎臟、神經(jīng)以及視網(wǎng)膜等并發(fā)癥進行了深入細致的研究，而對DM肺臟并發(fā)癥的研究相對較少。近年來，國內(nèi)外對DM肺的研究更多的是圍繞肺功能的降低，其病理和病理生理機制研究很少。在長期高血糖狀態(tài)引起組織損傷的機制中，晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)與DM多種慢性并發(fā)癥的始動及發(fā)展有密切關(guān)系，被公認為是高糖毒性引起慢性組織

2、損傷的重要原因之一，AGEs在DM患者肺中的變化未見報道。Ⅱ型肺泡上皮細胞及激活的成纖維細胞通過自分泌或旁分泌方式產(chǎn)生結(jié)締組織生長因子(CTGF)，調(diào)節(jié)成纖維細胞的和細胞外基質(zhì) 9extFacelluar matrix，ECM)的積聚，在肺纖維化進展中起重要作用。CTGF是一種新發(fā)現(xiàn)的致纖維化細胞因子，被視為轉(zhuǎn)化生長因子-B1(TGF-β1)的下游反應(yīng)元件。TGF-β有4型，其中TGF-β1和CTGP共同在肺間質(zhì)纖維化中起重要作用。二者

3、均具有促進成纖維細胞增殖以及參與ECM的產(chǎn)生、積聚等功能。本研究用免疫組織化學方法，觀察DM大鼠的肺組織AGEs、CTGF、TGF-β1的相關(guān)變化，來了解高糖毒性對肺組織的損害機制。 方法：48只SD(Sprague-Dawley)雄性大鼠隨機分為兩組：對照組和DM組，每組24只。鏈脲佐菌素(STZ)60mg/kg尾靜脈注射制造DM動物模型，對照組尾靜脈注射等量生理鹽水，DM動物模型血糖值均大于16.65mmol/L，造模成功。

4、對照組和DM組分別隨機分為4周亞組、12周亞組、20周亞組，每亞組8只大鼠。造模成功后4、12、20周末，分別處死大鼠，留取大鼠的肺組織，10％(體積分數(shù))福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋切片。應(yīng)用免疫組織化學方法觀察DM肺組織中AGEs、CTGF、TGF-β1沉積的部位及其變化。采用圖像分析軟件型圖像分析儀進行圖像分析。 結(jié)果： (1)造模成功后的DM大鼠出現(xiàn)明顯的多飲、多食、多尿癥狀，體重下降，活動減弱，一般狀態(tài)差。

5、 (2)AGEs免疫組化觀察及圖像分析顯示：DM各亞組大鼠肺泡上皮細胞以及巨噬細胞，支氣管粘膜上皮細胞，少量血管內(nèi)皮細胞及平滑肌細胞可見大量陽性細胞，陽性細胞的平均灰度值低于相應(yīng)階段的對照組，且隨著DM病程的進展逐漸降低。對照組的大鼠肺泡巨噬細胞，支氣管粘膜上皮細胞可見少量陽性細胞。 (3)CTGF、TGF-β1免疫組化觀察及圖像分析顯示：DM4周亞組大鼠的肺間質(zhì)細胞、支氣管粘膜上皮細胞，可見少量陽性細胞，對照組4周亞組的大鼠

6、少數(shù)血管內(nèi)皮細胞和少數(shù)氣管粘膜上皮細胞、可見少量陽性細胞，兩組間做比較，肺組織陽性細胞的平均灰度值無統(tǒng)計學差異：DMl2、20周亞組大鼠的肺間質(zhì)細胞、支氣管粘膜上皮細胞可見大量陽性細胞，陽性細胞的平均灰度值低于相應(yīng)階段的對照組。DM組的各個亞組的大鼠的肺組織陽性細胞的平均灰度值隨DM病程的進展逐漸降低。 (4)Pearson相關(guān)分析顯示：DM組的大鼠的肺組織AGEs與CTGF、 TGF-β1之間正相關(guān)。DM組CTGF與AGEs、