亞甲藍對長入疼痛椎間盤內神經纖維影響的實驗研究.pdf

1、腰痛是現(xiàn)代生活中高發(fā)的一種疾病，而椎間盤則是腰痛的一個重要致痛部位。這種由腰椎間盤內部結構變化引起的腰痛，稱為椎間盤源性腰痛。據(jù)估計40％的慢性腰痛由椎間盤內破裂癥(Internaldiscdisruption，IDD)引起。以往的實驗研究表明，纖維環(huán)放射狀裂隙由髓核延伸到纖維環(huán)外1/3，關聯(lián)到椎間盤源性腰痛的發(fā)生。同時近年來的一些動物實驗研究，對椎間盤源性腰痛的發(fā)病機制的探討支持了以上的觀點。但是由于椎間盤源性腰痛的復雜性導致適當?shù)膭?/p>

2、物模型制備比較困難，代價也比較高，設計一種相對簡單的動物模型來復制其主要病理改變具有重要的臨床意義。 亞甲藍是一種臨床上常用的藥物，臨床研究表明其對椎間盤源性腰痛的治療有效，而這種治療作用機制仍不是非常明確，以往的實驗研究表明椎間盤源性腰痛患者撕裂的纖維環(huán)中有一些對痛覺敏感的神經纖維長入，亞甲藍的這種治療作用與這些神經纖維的變化可能有關聯(lián)。 實驗擬通過損傷大鼠尾椎間盤纖維環(huán)建立IDD模型，通過組織學、影像學和免疫組化的方

3、法觀察椎間盤損傷后的病理改變情況。并通過該模型探討亞甲藍治療作用的機制。 目的： (1)建立鼠尾椎間盤內破裂模型，觀察大鼠尾椎間盤損傷后急性、亞急性、慢性病理變化及影像學特點； (2)通過免疫組化的方法初步探討亞甲藍注射治療對椎間椎間盤源性腰痛可能的作用機制。 方法： 18只SD大鼠，均為雄性，體重300-350g，用18G皮膚穿刺針頭分別在尾4/5、尾5/6椎間盤(大鼠的尾椎數(shù)為19-21節(jié)，取

4、其較寬大的尾椎近段椎間盤為實驗對象)前側進行穿刺。持針器夾持針頭，經皮穿刺，尖端進入3mm，保留5秒鐘，損傷SD大鼠尾4/5椎間盤全層纖維環(huán)作為實驗陽性對照椎間盤；尾5/6全層纖維環(huán)作為實驗椎間盤；尾6/7作為無損傷完整對照椎間盤。穿刺后將鼠尾反折成U型固定．術前，術后11周進行腰椎X線和MRI檢查觀察椎體和椎間盤的影像學變化；術后2周，6周，11周，三個時間點分別隨機提取2只動物，處死后進行HE，Masson染色光鏡下觀察三組椎間盤組

5、織學變化；并且術后11周，對余下動物實驗組(尾5/6)椎間盤進行亞甲藍溶液注射，一周后(術后12周)處死余下12只動物，選用SP(神經遞質)、PGP9.5(神經纖維)抗體，對三組椎間盤進行免疫組織化學染色觀察神經內生長情況． 結果： 組織學觀察顯示：尾4/5、尾5/6椎間盤在實驗期間前部纖維環(huán)損傷處未愈合。通過X線和MRI定性觀察發(fā)現(xiàn)，尾4/5、尾5/6椎間盤出現(xiàn)退變征象。損傷后12周，在尾4/5椎間盤的前1/4區(qū)可以檢

6、測到SP，PGP9.5免疫陽性染色神經纖維。神經纖維沿穿刺道向內生長。尾5/6椎間盤相同區(qū)域神經纖維出現(xiàn)很少。尾6/7椎問盤相同區(qū)域未檢測到相關免疫陽性反應細胞。在髓核中沒有發(fā)現(xiàn)免疫陽性染色細胞。 結論： (1)經大鼠尾椎間盤前方損傷全層纖維環(huán)并將鼠尾反折成U型后，損傷纖維環(huán)很難愈合，早期出現(xiàn)椎間盤退變。 (2)經大鼠尾椎間盤前方損傷椎間盤纖維環(huán)并外界施加長期的應力，可以方便的制備椎間盤纖維環(huán)破裂動物模型。