人參皂甙Rd對缺血性腦損害的保護作用.pdf

1、卒中是世界第二大死因，在發(fā)達國家是喪失勞力修正壽命年的第二大原因，在我國女性死因中列第二位，男性死因中列第三位。缺血性卒中約占卒中的80％，其早期治療主要有兩種途徑：血管再通和神經保護治療。使用tPA溶栓治療受限于其過窄的時間窗和對出血等并發(fā)癥的擔心，尚不能廣泛應用。神經保護的目標是挽救缺血半暗帶尚具活力的腦組織，雖然很多神經保護藥物未能在臨床試驗中證實其有效性，但其仍是卒中早期治療研究中的熱點，極具挑戰(zhàn)性。
　　人參皂甙Rd（G

2、SRd）是人參皂甙的主要活性成分之一，在三七中的含量高達4.07％，實際應用經濟。近來研究表明GSRd能夠拮抗Ca2+通道，對紅藻氨酸和氧化損傷中樞神經系統(tǒng)具有保護作用。本實驗使用海馬神經元氧糖剝奪（OGD）模型和大鼠大腦中動脈阻塞（MCAO）模型，探討了GSRd的神經保護作用和可能的作用機制。
　　1.體外實驗
　　目的研究GSRd對海馬神經元OGD損傷模型的保護作用和可能的作用機制。方法細胞取材自孕18天胎鼠，以B27/

3、Neurobasal培養(yǎng)基培養(yǎng)神經元。體外培養(yǎng)至第6-8天進行OGD實驗。OGD持續(xù)2h，之后復糖復氧24h。一組實驗中GSRd在OGD前及OGD結束復氧開始時兩次給藥，另一組實驗研究GSRd延后治療的效果，僅在OGD結束，復氧開始時給藥。24h后使用LDH法和Hoechst33342/PI雙重染色法來評定細胞活力。用熒光染料DCFH-DA來顯示活性氧簇（ROS），用羅丹明123來顯示線粒體膜電位（MMP）。熒光強度用流式細胞儀來測定。

4、細胞丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）活性用試劑盒以分光光度法來測量。我們還研究了GSRd對抗谷氨酸興奮性毒性的保護作用。結果PI吸收法顯示2h的OGD能夠造成約50％的細胞壞死，GSRd（0.1-10μM）能夠顯著的降低壞死細胞數量。LDH法也得出相似的趨勢。相反地，GSRd延后給藥未能顯示出顯著的保護作用。OGD后，ROS增加到基線的2.08倍，GSRd能夠顯著的降低ROS的蓄積，降低MDA水平，提高SOD活性。OGD導

5、致線粒體去極化，表現為羅丹明123的熒光強度降為基線的40.3％，GSRd能夠穩(wěn)定MMP。在興奮性毒性的模型上，谷氨酸導致大量LDH漏出，顯示明顯的細胞損傷。戲劇性地，GSRd幾乎能夠完全消除這一損傷作用。結論GSRd在培養(yǎng)的海馬神經元上對OGD損傷具有保護作用，這可能與其能夠抑制氧化應激損傷，保持MMP和對抗谷氨酸毒性作用有關。
　　2.在體實驗
　　目的在局灶性腦缺血大鼠模型上進一步探討GSRd的神經保護作用。方法用線栓

6、法來制備局灶性腦缺血模型，缺血持續(xù)2h，再灌注同時給予GSRd或溶劑（生理鹽水）對照給予治療。24h后進行神經功能缺損檢查并且用TTC染色法評估腦梗死體積。結果再灌注24h后，與溶劑治療組相比，GSRd治療組的動物在神經行為學上顯示出明顯的改善(GSRd10mg/Kg,P=0.012;GSRd30mg/Kg,P=0.002)。溶劑治療組動物的平均腦梗死體積為232.7mm3。GSRd治療能夠顯著的降低梗死體積（10mg/Kg,189.2