功勞木提取物DMAG逆轉(zhuǎn)人白血病K562-ADM細胞多藥耐藥的研究.pdf

1、目的：從中藥功勞木提取物中篩選出具有逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥活性的單體成分，研究其逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥作用，并探討其逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥作用機制。
　　 方法：通過高內(nèi)涵活細胞成像系統(tǒng)檢測功勞木提取物對人白血病K562/ADM細胞內(nèi)羅丹明123(rhodamine123，Rh123)蓄積的影響，篩選具有抑制K562/ADM細胞膜上P-gp功能的活性成分；MTT法檢測功勞木活性成分對K562及K562/ADM細胞的無毒劑量以及對阿霉素(adria

2、mycin，ADM)的耐藥逆轉(zhuǎn)作用；高內(nèi)涵系統(tǒng)檢測功勞木活性成分對ADM在K562/ADM細胞內(nèi)蓄積的影響；Rh123蓄積實驗進一步檢測活性成分對P—糖蛋白(P—glycoprotein，P—gP)功能的影響； PI/Hoechst33342雙染法檢測功勞木活性成分對ADM誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的影響；半定量RT—PCR法檢測功勞木活性成分對K562/ADM細胞MDR1耐藥基因表達的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1．從功勞木提取

3、物中篩選出6種具有抑制K562/ADM細胞膜上P—gp功能的活性成分，其中活性最強的為DMAG，本論文即研究該化合物對K562/ADM細胞的MDR的逆轉(zhuǎn)作用。
　　 2．MTT檢測結(jié)果顯示，0．1μmol/L為DMAG的無毒劑量，其對K562細胞和K562/ADM細胞的抑制率均<10％。在無毒劑量及其以下設(shè)置5個濃度(0．01μmol/L、0．02μmol/L、0．04μmol/L、0．08μmol/L、0．1μmol/L)分別

4、與ADM聯(lián)用，可濃度依賴性地逆轉(zhuǎn)K562/ADM細胞的耐藥性(逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為3．17、3．99、5．01、6．14、6．45)，其逆轉(zhuǎn)作用明顯強于陽性對照維拉帕米(Verapamil)。
　　 3．ADM蓄積實驗檢測結(jié)果顯示耐藥細胞內(nèi)熒光信號明顯減少，而經(jīng)DMAG處理后逐漸恢復(fù)到接近敏感株細胞的水平，表明DMAG能直接抑制P—gp的功能，恢復(fù)ADM在細胞內(nèi)的正常分布而達到逆轉(zhuǎn)耐藥的目的。
　　 4．Rh123蓄積實驗檢測

5、結(jié)果顯示無毒劑量的DMAG可劑量相關(guān)性增加耐藥細胞株K562/ADM細胞內(nèi)Rh123的蓄積，對K562細胞內(nèi)。Rh123的蓄積沒有影響。
　　 5．無毒劑量的DMAG單獨使用時對K562和K562/ADM細胞凋亡沒有影響，與ADM聯(lián)用后均可增強ADM誘導(dǎo)的K562/ADM細胞凋亡，作用明顯強于單用ADM引起的細胞凋亡，與ADM聯(lián)用后對K562細胞的凋亡同只用ADM引起的細胞凋亡相當(dāng)。
　　 6．半定量RT—PCR法檢測結(jié)

6、果顯示DMAG作用前后K562/ADM細胞內(nèi)MDR1基因表達水平有下調(diào)趨勢，且隨濃度增加下調(diào)趨勢逐漸明顯。
　　 結(jié)論：
　　 1．功勞木提取物DMAG具有較強的逆轉(zhuǎn)人白血病K562/ADM細胞多藥耐藥活性。
　　 2．DMAG通過下調(diào)MDR1基因及其蛋白產(chǎn)物P—gp的表達水平、抑制K562/ADM細胞膜上P—gp的外排功能，恢復(fù)P—gp介導(dǎo)的腫瘤多藥耐藥細胞株對藥物的敏感性，增加細胞內(nèi)ADM濃度，提高ADM對耐