紅花注射液抗血栓藥效物質(zhì)基礎初步研究.pdf

1、血栓性疾病包括血栓形成和血栓栓塞兩種病理過程所引起的疾病，又稱血栓栓塞性疾病。具有高發(fā)病、高復發(fā)、高致死、高致殘的特點。常見的深靜脈血栓、冠心病、心肌梗死、中風、肺栓塞等多種嚴重疾病都屬于血栓性疾病，預計到2020年將成為全球第一大疾病，已引起了社會高度重視，并被認為是當今醫(yī)學和社會學難題之一。
　　紅花是用于治療心腦血管疾病的常用中藥。紅花注射液是通過水提、醇沉工藝制備的單方注射液，主要應用于閉塞性腦血管病、冠心病和脈管炎等疾病

2、的預防和治療。經(jīng)過30余年的臨床應用，證明療效確切，是目前國內(nèi)用于治療心腦血管疾病的首選中藥制劑之一。但要使其作為一種治療藥物更加合理廣泛的應用，使其療效和安全性得到更加可靠的保證，并能為國際市場接受并具有市場競爭力的中藥制劑，還需要更深入的物質(zhì)基礎研究，用現(xiàn)代科學技術闡明其藥效物質(zhì)和作用機理。但目前國內(nèi)外對紅花注射液的研究主要集中在臨床觀察和藥理研究方面，對其藥效物質(zhì)基礎的研究尚未見報道。
　　在中藥藥效物質(zhì)基礎研究中，很重要的

3、一個環(huán)節(jié)是效應成分篩選方法要體現(xiàn)出中藥療效作用的整體性、多靶點性和多成分協(xié)同作用的特點。血小板細胞固相萃取篩選法是依據(jù)生物活性細胞對效應成分特異性結合原理，通過緩沖液多次洗滌排除非特異性結合成分，再對解離液成分分離分析來篩選出生物活性化合物。完整細胞保留了細胞上靶點的完整性、空間性、周圍環(huán)境及生物活性，且能夠特異性地、有選擇性地與活性成分結合，特別是細胞上的已知及未知的靶點都得到了表達，適合中藥作用多靶點的活性成分的分離與分析。

4、　　本研究通過將紅花注射液整體化學物質(zhì)拆分為子化學物質(zhì)組，利用藥理實驗篩選有效化學物質(zhì)組;運用血小板細胞固相萃取法篩選有效物質(zhì)組中與血小板結合效應成分;并進一步對效應化學成分進行分離鑒定，通過藥理實驗評價與血小板結合效應成分的藥理作用。采用層次化、系統(tǒng)化及逐步優(yōu)化的研究策略，從整體化學物質(zhì)組、有效化學物質(zhì)組、有效化學成分等不同層次逐步深入研究紅花注射液藥效物質(zhì)基礎。本文研究主要分為以下幾個方面
　　1.選擇不同柱材料對紅花注射液進

5、行分離，綜合HPLC圖譜及化學成分結構相似原則，將紅花注射液整體化學物質(zhì)組拆分為5個子化學物質(zhì)組，ADP誘導血小板體外聚集實驗結果顯示組分第1，5具有較強抑制血小板聚集作用，第2組分具有較強的促進血小板聚集作用，第3，4組分活性較弱。
　　2.采用血小板固相萃取結合HPLC實驗篩選紅花水加醇提取物、紅花注射液有效化學物質(zhì)組2、組5中與血小板結合的效應成分。在280nm，350nm，402nm紫外檢測波長下檢測，從紅花提取物中篩選出

6、10個與血小板結合的效應成分，其中兩種鑒定為羥基紅花黃色素A或其同分異構體及紅花黃色素B;從紅花注射液D-2組分中篩選出3個與血小板結合的效應成分，其中一種鑒定為羥基紅花黃色素A或其同分異構體;從紅花注射液D-5組分中篩選出與血小板結合的效應成分主要有13個，其中一種鑒定為6-羥基山萘酚-3-氧葡萄糖苷。
　　3.分離得到三種與血小板結合效應成分:羥基紅花黃色素A、紅花黃色素B及6-羥基山萘酚-3-氧葡萄糖苷。在分離純化HSYA的

7、過程中，發(fā)現(xiàn)兩個黃色色帶都與HSYA對照品具有相同Rf值，經(jīng)紫外、紅外、質(zhì)譜、核磁以及圓二色譜等波譜學進行結構鑒定兩個化合物（化合物Ⅰ、化合物Ⅱ）的結構比較相似，互為非對映異構體。
　　4.通過大鼠體外抗ADP誘導的血小板聚集作用及對凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)實驗評價與血小板結合效應成分的抗血栓作用。藥理實驗結果表明:化合物Ⅰ、6-羥基山萘酚-3-氧葡萄糖苷及紅花黃色素B對ADP誘導

8、的家兔血小板聚集具明顯的抑制作用，且可明顯延長大鼠血漿PT和家兔血漿APTT，提示化合物Ⅰ，紅花黃色素B及6-羥基山萘酚-3-氧葡萄糖苷對內(nèi)源性及外源性凝血系統(tǒng)均具抑制作用。但化合物Ⅱ?qū)DP誘導的家兔血小板聚集則具有明顯促進作用，可延長大鼠血漿PT作用，但可縮短大鼠血漿APTT作用，提示化合物Ⅱ?qū)ν庠葱阅到y(tǒng)具有抑制作用，但對內(nèi)源性凝血系統(tǒng)具有促進作用。
　　本文采用血小板細胞固相萃取法從紅花注射液中篩選出16種與血小板結合的