α-MSH對糖尿病視網膜血管內皮細胞保護作用的機制研究.pdf

1、目的:氧化應激和細胞凋亡貫穿于早期糖尿病視網膜病變中。本研究的目的是檢測α促黑素細胞激素(α-MSH)在早期糖尿病視網膜病變中對視網膜血管內皮細胞的抗氧化應激和抗凋亡作用及其機制的探索。
　　方法:SD大鼠尾靜脈注射鏈脲佐菌素誘發(fā)糖尿病，然后玻璃體腔注射α-MSH進行治療。在糖尿病第5周，取出視網膜進行基因表達和活性氧簇分析。再1周后，取眼杯進行透射電子顯微鏡掃描和末端脫氧核苷酸轉移酶dUTP缺口末端標記染色。體外實驗中視網膜血管

2、內皮細胞進行高糖處理，用或不用α-MSH進行干預。通過實時定量PCR檢測O類叉頭框蛋白(FoxOs)的表達。在內皮細胞中經瞬時轉染過表達FoxO4基因，再經α-MSH和/或高糖處理，然后用CM-H2DCFDA和Annexin-Ⅴ分別對氧化應激和細胞凋亡的水平進行分析。
　　結果:在糖尿病大鼠的視網膜中，α-MSH治療可以正常化NO2-/NO3-和H2O2的水平。糖尿病大鼠組的NO2-/NO3-水平顯著增高，而糖尿病α-MSH治療組

3、可以將NO2-/NO3-水平正?；呌谡Ｋ?α-MSH治療組與正常組相比， p=0.324)。糖尿病大鼠的H2O2顯著增高，而糖尿病治療組可以顯著降低H2O2，使其降低到正常水平（α-MSH治療組與正常組相比，p=0.949）。α-MSH可以大幅地減少糖尿病視網膜血管內皮細胞和神經細胞的凋亡細胞數(shù)，（α-MSH治療組與DM組相比，P＜0.001）。α-MSH有效地改善超微結構的病理損傷。實時定量PCR結果顯示在糖尿病視網膜中，eNO

4、S表達下調，iNOS，ICAM-1和TNF-α的表達上調，而這些基因表達的異常可以被α-MSH校正(α-MSH治療組與DM組相比，P＜0.1)。在糖尿病視網膜中檢測到FOXO4的表達上調，α-MSH糖尿病視網膜玻璃體腔注射組FOXO4的表達上調受到抑制，接近于正常水平（DM組與α-MSH+ DM組相比，P＜0.05;α-MSH+DM組與Normal組相比，P=0.03）。在體外實驗暴露于高糖的內皮細胞中，α-MSH可以抑制FOXO4的上

5、調。在視網膜血管內皮細胞過量表達FOXO4基因，α-MSH失去其抗氧化應激和抗凋亡的能力，證明α-MSH是通過抑制FOXO4基因的上調來實現(xiàn)其抗氧化應激及抗凋亡的機制的。
　　結論:在早期糖尿病視網膜，α-MSH能正?；趸瘧に剑瑴p少視網膜血管內皮細胞及神經細胞的凋亡，有效改善糖尿病所導致的超微結構的損傷，并糾正氧化應激及炎癥相關基因表達的異常。α-MSH對視網膜血管內皮細胞的保護作用可能是通過抑制高糖誘導下轉錄水平上FOXO