SSeCKS蛋白在新生大鼠高氧肺損傷中的表達及意義.pdf

1、目的：采用新生SD大鼠建立高氧肺損傷動物模型，動態(tài)觀察肺組織濕干重質量比和病理改變，檢測高氧暴露各時相點新生大鼠肺組織中Src抑制的蛋白激酶C的底物(Src suppressed Ckinase substrate，SSeCKS)的表達，闡述SSeCKS蛋白與高氧肺損傷的關系：觀察高氧刺激肺毛細血管內(nèi)皮細胞中SSeCKS蛋白的表達及對細胞骨架的影響，探討SSeCKS蛋白參與高氧肺損傷的病理機制。 方法：1,64只出生12 h內(nèi)的

2、SD清潔級大鼠，隨機分為2組：空氣對照組、高氧暴露組，每組8只。高氧暴露組置于常壓高氧艙中，保持氧濃度>95％，空氣對照組置于同一室內(nèi)，于12 h、24 h、48 h和72 h處死動物后分別進行肺組織濕干重質量比(W/D)、肺組織病理HE染色、Western blot法及間接免疫酶標法檢測肺組織中SSeCKS蛋白的表達，間接免疫熒光雙重標記法明確SSeCKS蛋白在肺組織的細胞定位。 2.128只出生12 h內(nèi)的SD清潔級大鼠，隨

3、機分為4組：D:空氣對照組；n):高氧暴露組；III):高氧露+R031-8220(蛋白激酶C抑制劑)組；Ⅳ)：高氧暴露+生理鹽水組，每組8只。II、III、IV組置于常壓高氧艙中，保持氧濃度>95％，I組置于同一室內(nèi)，III組自高氧暴露第一天起腹腔注射R031-8220，連續(xù)3天，同時Ⅳ組腹腔注射生理鹽水。分別于高氧暴露12 h、24 h、48 h、72 h處死動物，進行肺組織濕干重質量比(W/D)、病理HE染色檢查，于高氧暴露72

4、h觀察各組肺毛細血管內(nèi)皮細胞中SSeCKS蛋白的表達及其與細胞骨架的關系。 結果： 1.高氧暴露各時相點肺組織中SSeCKS蛋白的表達與肺損傷 12 h時相點：與空氣對照組相比，高氧暴露組W/D、肺組織病理HE染色及SSeCKS蛋白表達無差異；24 h時相點：高氧暴露組W/D無改變，病理HE染色肺泡內(nèi)出現(xiàn)少量紅細胞，肺泡壁增厚，開始出現(xiàn)急性肺損傷表現(xiàn)，SSeCKS蛋白表達開始增加；48 h時相點：高氧暴露組W/D

5、增加，病理HE染色肺泡內(nèi)紅細胞增多，肺間隔增寬，粒細胞附壁，出現(xiàn)急性炎癥反應和肺水腫，SSeCKS蛋白表達進一步增加；72 h時相點：高氧暴露組W/D進一步增加，病理HE染色，肺泡內(nèi)可見大量的紅細胞，肺泡間隔粒細胞浸潤，炎癥、水腫進一步加重，出現(xiàn)肺出血， SSeCKS蛋白表達達到最高，且主要定位在肺毛細血管內(nèi)皮細胞。 2.高氧暴露時肺毛細血管內(nèi)皮細胞中SSeCKS蛋白的表達與肺損傷 2.1各組各時相點肺組織(W/D)及病

6、理改變：12 h時相點：各組W/D、病理HE染色，均無改變；24 h時相點：各組W/D無差異，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組病理HE染色肺泡內(nèi)出現(xiàn)少量紅細胞，I組無改變；48 h時相點：Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組W/D增加，病理HE染色肺泡內(nèi)紅細胞增多，肺間隔增寬，粒細胞附壁；72 h時相點，Ⅱ、Ⅳ組W/D與Ⅰ組比較增加，出現(xiàn)明顯急性炎癥包括炎癥細胞浸潤、出血、水腫，高氧刺激引起肺組織急性炎癥、水腫及肺出血；Ⅲ組W/D降低，病理改變較Ⅱ組、Ⅳ明顯減輕， PKC抑制劑R

7、031-8220可以明顯減輕高氧肺損傷病理改變。 2.272 h時相點各組SSeCKS蛋白的表達及亞細胞位置的變化：Ⅰ組，SSeCKS蛋白主要分布在細胞膜；Ⅱ、Ⅳ組，SSeCKS蛋白表達與Ⅰ組比較增加，主要表達在細胞質中，高氧暴露可以引起毛細血管內(nèi)皮細胞中SSeCKS表達增加及亞細胞位置的改變；Ⅲ組，SSeCKS蛋白表達與Ⅱ、Ⅳ組比較明顯減少，SSeCKS蛋白主要表達在細胞膜，PKC抑制劑R031-8220可以抑制毛細血管內(nèi)皮細

8、胞中SSeCKS的表達及亞細胞位置的改變。 2.372時相點各組毛細血管內(nèi)皮細胞中細胞骨架的的變化：Ⅰ組：內(nèi)皮細胞中細胞骨架在細胞質中均勻分布，Ⅱ、Ⅳ組：細胞骨架應力纖維形成，細胞形態(tài)改變，細胞間間隙增加；Ⅲ組中PKC抑制劑可以部分抑制細胞骨架重構。 結論： 1)新生大鼠持續(xù)高氧暴露24 h開始出現(xiàn)急性肺損傷的病理改變，72 h可以引起明顯的炎癥、水腫及肺出血； 2)高氧暴露刺激新生大鼠肺組織中SSeCK