CD2胞內區(qū)結合蛋白的分子克隆及功能研究.pdf

1、CD2具有調節(jié)T淋巴細胞成熟、分化、激活和凋亡等功能,是介導淋巴細胞信號傳遞和細胞間粘附作用的重要免疫分子.為了闡明CD2在細胞激活與凋亡中的重要作用及其免疫學意義,該論文進行了以下幾個方面的作用:1、建立了酵母雙雜交系統(tǒng),以CD2分子胞內區(qū)為釣餌,篩選了人T淋巴細胞KT3 cDNA文庫,獲得了一個與CD2胞內區(qū)結合的胞內蛋白,命名為CD2cBP,此蛋白與v-fos轉化效應蛋白(Fte-1)同源.2、利用免疫共沉淀法證明,在哺乳動物細胞

2、內,CD2cBP特異地與CD2胞內區(qū)結合.3、利用5'-RACE及RT-PCR方法證實,人外周血淋巴細胞及Jurkat T淋巴細胞中均有CD2cBP和其同源蛋白Fte-1的表達,并用RT-PCR方法獲得了人外周血淋巴細胞Fte-1的全長cDNA,為進一步比較和研究CD2cBP及Fte-1的功能打下基礎.4、以佛波酯PMA激活內源性PKC和從大鼠腦組織內提取的外源性PKC分別從細胞內、外兩個角度證明了PKC可使CD2cBP及其同源蛋白Ft

3、e-1磷酸化,該磷酸化作用可以被PKC的特異抑制劑抑制.5、利用綠色熒光蛋白與CD2cBP融合,觀察了CD2cBP在Jurkat T淋巴細胞內的定位,發(fā)現CD2cBP在細胞胞漿內均勻分布,在抗CD2單元克隆抗體刺激下,CD2cBP向胞膜內側區(qū)域聚集,推測此趨向性變化有利于CD2cBP與CD2分子胞內區(qū)結合,并可能與PKC磷酸化在關.6、CD2cBP的功能研究表明,CD2cBP和Fte-1在Jurkat T淋巴細胞中過量表達,顯著抑制抗C