預防仔豬腹瀉基因工程菌株的構建.pdf

1、河北師范大學碩士學位論文預防仔豬腹瀉基因工程菌株的構建姓名：柏佳寧申請學位級別：碩士專業(yè)：遺傳學指導教師：趙寶華20060520河北師范大學碩士研究生學位論文摘要由產腸毒素型大腸桿菌引起的仔豬黃白痢和由魏氏梭菌引起的仔豬紅痢是影響豬體健康的常見疾病，可嚴重影響仔豬的存活率和出欄率，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經濟損失。本文采用微生物分離方法從欒城縣某養(yǎng)豬場患病仔豬的糞便中分離到致病性大腸桿菌，經形態(tài)學、生化和分子生物學鑒定為產腸毒素型大腸桿菌。

2、以此菌株為研究對象，根據(jù)G_cneBaIlk公布的豬源致病性大腸桿菌LTB基因全序列設計了一對引物，以分離菌株的基因組為模板擴增出u’B基因，序列分析表明與其它參考菌株M17873(豬源ETEc的LTB)序列同源性為100％。然后，利用定點突變技術將形成sTl分子內二硫鍵的半胱氨酸堿基進行了突變，最后將突變的STl基因與LTB基因融合，定向克隆于原核表達載體pET28b中，得到了重組質粒pBETST3LTB，轉化受體菌BL21(DE3)

3、，得到重組菌株BL2l(DE3)(pBETST3LTB)，該菌株經IPTG誘導后，SDSPAGE分析可見其表達的30KD特異蛋白條帶，經sT和Ⅱ’ELIsA檢測試劑盒檢測，重組菌株表達的sTlLTB融合蛋白能夠被ST和LT單抗識別。從本實驗室保存的預防仔豬紅痢的基因工程候選菌株的質粒中擴增出魏氏梭菌aD毒素保護性抗原基因，通過分子生物學手段構建到STl—L1’B基因下游，得到了重組菌株BL21(DE3)(pBETST3LTB旺p)，該菌