尼古丁對T淋巴細胞分化的影響.pdf

1、目的:觀察尼古丁對T淋巴細胞亞群CD4<'+>細胞和CD8<'+>細胞分化的影響,以及對CD4<'+>細胞中Th1、Th2細胞分化的影響,為尼古丁對免疫系統(tǒng)的作用提供進一步的證據(jù).方法:(1)20只6-8周的BALB/C雌性小鼠隨機分為4組:對照組、1.5mg組、3.0 mg組和6.0 mg組.對照組小鼠腹部皮下注射生理鹽水溶液,另三組分別按1.5mg/kg,3.0 mg/kg,6.0 mg/kg注射尼古丁溶液,均連續(xù)注射3周;無菌取小

2、鼠脾臟,不銹鋼網(wǎng)制備脾細胞溶液,尼龍棉柱法分離T淋巴細胞;分別加入Thy-1-FITC抗體,CD4-FITC抗體和CD8-PE抗體,流式細胞儀檢測并分析T細胞的分離率及CD4<'+>細胞與CD8<'+>細胞的比值;(2)使用Mouse Th1/Th2 Cytokine CBA試劑盒檢測血漿樣品中5種細胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ和TNF-α的濃度.(3)抽提T淋巴細胞總RNA,設計以上五種細胞因子的特異引物,RT-PC

3、R法擴增特異片段,瓊脂糖凝膠電泳并照相,凝膠分析系統(tǒng)分析結果.結果:(1)T淋巴細胞的分離率在78.53％-83.66％之間,即應用尼龍棉柱法分離T淋巴細胞可達到80％左右的分離率;對T淋巴細胞中CD4/CD8比例的測定結果顯示,3個濃度組和對照組相比均有顯著性差異,P<0.05,說明尼古丁影響T淋巴細胞CD4<'+>和CD8<'+>亞群的分化,使CD4/CD8比例降低,而且,高濃度尼古丁的作用更加顯著.(2)經(jīng)不同濃度尼古丁處理后,血

4、漿中五種細胞因子的含量發(fā)生明顯改變:IL-2和TNF-α濃度增加,IL-4和IL-5濃度降低.IFN-γ沒有檢測到.(3)RT-PCR結果顯示,經(jīng)不同濃度尼古丁處理后,T細胞內(nèi)五種細胞因子的基因表達均受到不同程度的影響,IL-4、IL-5和TNF-α的基因表達下降,IL-2和IFN-γ基因表達增高.結論:小鼠經(jīng)尼古丁處理后,CD4<'+>細胞與CD8<'+>細胞的比值下降,Th2細胞因子(IL-4、IL-5)的表達下降,Th1細胞因子(