尼古丁對(duì)T淋巴細(xì)胞分化的影響.pdf

1、目的:觀察尼古丁對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群CD4<'+>細(xì)胞和CD8<'+>細(xì)胞分化的影響,以及對(duì)CD4<'+>細(xì)胞中Th1、Th2細(xì)胞分化的影響,為尼古丁對(duì)免疫系統(tǒng)的作用提供進(jìn)一步的證據(jù).方法:(1)20只6-8周的BALB/C雌性小鼠隨機(jī)分為4組:對(duì)照組、1.5mg組、3.0 mg組和6.0 mg組.對(duì)照組小鼠腹部皮下注射生理鹽水溶液,另三組分別按1.5mg/kg,3.0 mg/kg,6.0 mg/kg注射尼古丁溶液,均連續(xù)注射3周;無菌取小

2、鼠脾臟,不銹鋼網(wǎng)制備脾細(xì)胞溶液,尼龍棉柱法分離T淋巴細(xì)胞;分別加入Thy-1-FITC抗體,CD4-FITC抗體和CD8-PE抗體,流式細(xì)胞儀檢測(cè)并分析T細(xì)胞的分離率及CD4<'+>細(xì)胞與CD8<'+>細(xì)胞的比值;(2)使用Mouse Th1/Th2 Cytokine CBA試劑盒檢測(cè)血漿樣品中5種細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ和TNF-α的濃度.(3)抽提T淋巴細(xì)胞總RNA,設(shè)計(jì)以上五種細(xì)胞因子的特異引物,RT-PC

3、R法擴(kuò)增特異片段,瓊脂糖凝膠電泳并照相,凝膠分析系統(tǒng)分析結(jié)果.結(jié)果:(1)T淋巴細(xì)胞的分離率在78.53％-83.66％之間,即應(yīng)用尼龍棉柱法分離T淋巴細(xì)胞可達(dá)到80％左右的分離率;對(duì)T淋巴細(xì)胞中CD4/CD8比例的測(cè)定結(jié)果顯示,3個(gè)濃度組和對(duì)照組相比均有顯著性差異,P<0.05,說明尼古丁影響T淋巴細(xì)胞CD4<'+>和CD8<'+>亞群的分化,使CD4/CD8比例降低,而且,高濃度尼古丁的作用更加顯著.(2)經(jīng)不同濃度尼古丁處理后,血

4、漿中五種細(xì)胞因子的含量發(fā)生明顯改變:IL-2和TNF-α濃度增加,IL-4和IL-5濃度降低.IFN-γ沒有檢測(cè)到.(3)RT-PCR結(jié)果顯示,經(jīng)不同濃度尼古丁處理后,T細(xì)胞內(nèi)五種細(xì)胞因子的基因表達(dá)均受到不同程度的影響,IL-4、IL-5和TNF-α的基因表達(dá)下降,IL-2和IFN-γ基因表達(dá)增高.結(jié)論:小鼠經(jīng)尼古丁處理后,CD4<'+>細(xì)胞與CD8<'+>細(xì)胞的比值下降,Th2細(xì)胞因子(IL-4、IL-5)的表達(dá)下降,Th1細(xì)胞因子(