甲基蓮心堿對人卵巢癌順鉑耐藥逆轉的體外研究.pdf

1、目的: 研究甲基蓮心堿(neferine,NEF)對人卵巢癌耐藥細胞SKOV3/DDP增殖、對耐藥細胞內順鉑敏感作用及細胞內GST-π( glutathione S-transferase-π)基因表達的影響,初步探討NEF對人卵巢癌耐藥細胞SKOV3/DDP的逆轉作用,為臨床開發(fā)應用NEF作為化療增敏藥及耐藥逆轉劑提供實驗依據。
　　方法: (1)體外培養(yǎng)人卵巢癌細胞株SKOV3及其耐順鉑細胞株SKOV3/DDP至對數生長期;(

2、2)采用免疫細胞化學法檢測GST-π蛋白在人卵巢癌細胞中的表達;(3)采用細胞毒實驗(MTT)法篩選NEF對耐藥株的無毒劑量,并測定無毒劑量Nef干預SKOV3/DDP后耐藥性變化;(4)應用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測耐藥細胞和親本敏感細胞GST-πmRNA水平表達的差異,分析NEF對GST-π表達的影響。
　　結果: (1)單用NEF對SKOV3/DDP細胞生長有抑制作用,且隨活性濃度增加增殖抑制率相應上升,該作

3、用與藥物劑量呈依賴關系,1、5、10 ug/ml NEF對細胞無明顯細胞毒性,(細胞抑制率小于10％),本實驗選用無毒劑量10ug/ml作為逆轉劑量;當DDP與無毒劑量NEF聯合作用時,使DDP對SKOV3/DDP的IC50分別下降,且逆轉倍數隨藥物作用時間延長而增大,分別為1.15、1.91、2.28倍,各時間組間有顯著統(tǒng)計學意義( P<0.01);(2)免疫細胞化學染色后,鏡下SKOV3/DDP細胞中GST-π表達高于敏感SKOV3