海水鈍頂螺旋藻多糖對免疫低下小鼠及慢性乙型肝炎患者免疫功能的影響.pdf

1、[目的]: 從海南生產(chǎn)的海水鈍頂螺旋藻中提取多糖，并研究其對環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫功能的影響，及其對慢性乙型肝炎患者外周血單個核細胞免疫功能的影響，探討其在生物醫(yī)藥領(lǐng)域中應(yīng)用可能性，為進一步深入研究鈍頂螺旋藻多糖的功能和應(yīng)用提供理論及實驗依據(jù)。 [方法]： 采用改良的三氯乙酸法提取海水鈍頂螺旋藻多糖。用紅外光譜法測定鈍頂螺旋藻多糖分子結(jié)構(gòu)。用環(huán)磷酰胺腹腔注射法建立免疫功能低下小鼠的模型，再分別給予2mg/m

2、l、4mg/ml和8mg/ml鈍頂螺旋藻多糖，運用MTT法和比色法檢測各組小鼠脾細胞、胸腺細胞增殖能力和小鼠巨噬細胞吞噬功能、分泌IL-1功能。用流式細胞術(shù)和 ELISA 法分別檢測細胞周期變化和小鼠脾細胞培養(yǎng)上清 IFN-γ濃度變化；采用Greiss法檢測各組小鼠巨噬細胞分泌NO功能。運用MTT法和流式細胞術(shù)分別測定鈍頂螺旋藻多糖對慢性乙型肝炎患者外周血單個核細胞增殖能力和細胞周期的影響，采用ELISA 法檢測外周血單個核細胞培養(yǎng)上清

3、細胞因子IFN-γ、IL-2和IL-4濃度，同時用RT-PCR法檢測外周血單個核細胞IFN-γmRNA的表達。 [結(jié)果]： 1．得到灰白色粉末狀海水鈍頂螺旋藻多糖，多糖含量92.62％。紅外光譜顯示鈍頂螺旋藻多糖的糖苷鍵為僅α-構(gòu)型，具有吡喃型糖環(huán)。 2．12.5μg/ml～1000μg/ml鈍頂螺旋藻多糖能夠增強ConA或LPS誘導(dǎo)的小鼠脾細胞增殖和巨噬細胞吞噬功能，且呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。 3．模型對照組

4、小鼠脾細胞和胸腺細胞增殖明顯低于正常對照組，脾細胞和胸腺細胞細胞周期與正常對照組相比發(fā)生G0/G1期阻滯，2mg/ml、4mg/ml 和8mg/ml鈍頂螺旋藻多糖能顯著提高環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠脾細胞和胸腺細胞的增殖能力，使脾細胞和胸腺細胞細胞周期發(fā)生S期和G2/M 期轉(zhuǎn)換。 4．模型對照組小鼠巨噬細胞吞噬功能、分泌IL-1和NO濃度明顯低于正常對照組，2mg/m、4mg/m和8mg/m鈍頂螺旋藻多糖能顯著提高環(huán)磷酰胺所致免疫

5、低下小鼠巨噬細胞的免疫功能。 5．模型對照組小鼠脾細胞分泌IFN-γ濃度明顯低于正常對照組，2mg/ml、4mg/ml和8mg/ml鈍頂螺旋藻多糖能顯著提高環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠脾細胞分泌IFN-γ。 6．12.5μg/ml～1000μg/ml鈍項螺旋藻多糖能顯著增強慢性乙型肝炎患者外周血單個核細胞的增殖能力，并使其細胞周期發(fā)生S期和G2/M期轉(zhuǎn)換。 7．鈍頂螺旋藻多糖能顯著增強慢性乙型肝炎患者外周血單個核細胞

6、分泌細胞因子IFN-γ和IL-2，且能顯著降低慢性乙型肝炎患者外周血單個核細胞分泌細胞因子IL-4。 8．100μg/ml、200μg/ml和400μg/ml鈍頂螺旋藻多糖能顯著上調(diào)慢性乙型肝炎患者外周血單個核細胞IFN-γ mRNA的表達。 [結(jié)論]： 從海水鈍頂螺旋藻中成功分離得到具有免疫活性的鈍頂螺旋藻多糖，該多糖能夠提高環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫功能，對慢性乙型肝炎患者外周血單個核細胞的免疫功能具有調(diào)