調控辣椒素生物合成的主要轉錄因子篩選及功能驗證.pdf

1、分類號：S682.2密級：碩士學位論文調控辣椒素生物合成的主要轉錄因子篩選及功能驗證毛艷輝指導教指導教師：雷建軍教授學院名學院名稱：園藝學院專業(yè)名專業(yè)名稱：蔬菜學答辯委員會主席：答辯委員會主席：段俊研究員中國廣州2016年6月I摘要辣椒素只有在辣椒屬植物中才能合成，并且辣椒素應用廣泛。通過對辣椒素的不斷研究，辣椒素的生物合成途徑已基本闡明，但是對辣椒素合成途徑的調控機制卻鮮有報道。本研究根據(jù)辣椒基因組數(shù)據(jù)及生物信息學方法篩選5個辣椒轉錄

2、因子（AP2ERF和WRKY），利用VIGS、qRTPCR、酵母單雜交等技術對它們進行功能鑒定，期望找出具有不同辣度的品種間在這些轉錄因子上的差異，為挖掘“涮涮辣”高辣椒素基因奠定基礎。得到的研究結果如下：(1)PCR初步檢測得到了29株轉CaAT3過表達的T0代轉基因番茄。轉化體的進一步鑒定正在進行。(2)不同辣度的辣椒品種的啟動子序列比對結果如下：辣椒素合成途徑中結構基因AT3的啟動子中，?59?（中辣品種）和?WL?（微辣品種）只

3、存在1個堿基的差異，?740?(辣椒素含量最高的品種)和?59?有較大差異；對?59??170??740??XN?（中辣品種）的pAMT啟動子序列比較分析，發(fā)現(xiàn)?59?和?170?(甜椒品種無辣椒素)只有1個堿基的差異，?59?和?XN?有3個堿基的差異，?170?和?XN?有2個堿基差異，而?740?與其他3個品種的辣椒存在較大差異。對COMT啟動子序列的比對發(fā)現(xiàn)在?59??170??740?三個品種中只有?170?和其余兩個品種相差

4、4個堿基，?59?和?740?比對后COMT啟動子序列是一致的。KAS啟動子序列比對發(fā)現(xiàn)不同辣椒品種之間差異較大，其中?59?和?170?相差11個堿基，?59?和?740?相差21個堿基，?170?和?740?相差26個堿基。(3)分離了“59”號辣椒的AT3pAMTCOMTKASPAL的啟動子序列，并對它們進行了元件分析，發(fā)現(xiàn)這些基因的啟動子序列都含有啟動子核心元件及ERF和WRKY的識別序列。(4)根據(jù)Kim等（2014）對辣椒基

5、因組測序結果，經(jīng)過生物信息學分析，初步篩選出5個ERF轉錄因子，并依次命名為CaERF1CaERF2CaERF3CaERF4和CaERF5。根據(jù)Qin等（2014）對?Zunla1?(CapsicumannuumL.)及其野生種?Chiltepin?(C.annuumvar.glabriusculumalsotermedC.annuumvar.aviculare)的基因組測序結果，經(jīng)生物信息學分析，初步篩選出參與辣椒素合成的WRKY家族