低氧預適應對大鼠移植肝臟肝竇內皮細胞影響的實驗研究.pdf

1、1.目的本實驗在建立大鼠原位活體肝移植(orthotopiclivertransplantation，OLT)模型的基礎上，通過對供肝大鼠術前低氧預適應處理(hypoxicpreconditioning，HP)，研究移植肝臟術后2h、24h和48h肝竇內皮細胞的功能、結構變化，同時探討這些病理變化與HP相關的HIF-1a表達的相互關系，研究HP對肝移植大鼠肝臟的影響。 2.方法2.1清潔級SD大鼠，隨機分為3組，模型對照組(A組

2、)：不進行低氧處理的原位肝移植組共30例；低氧移植組(B組)：供肝大鼠先進行90min的低氧適應，然后于8小時后切除肝臟作為供肝，行原位肝臟移植。C組：正常大鼠。兩組肝移植大鼠均采用Kamada的二袖套法，并加技術改進施行大鼠原位肝移植。 2.2各組大鼠均在肝移植術后2h、24h和48h處死六只，切取肝中葉作為標本，做肝組織切片在光鏡、電鏡下觀察SEC的結構變化及其超微結構的變化。SP免疫組織化學法檢測HIF-1a的表達。放射免

3、疫法檢測血清ET-1及HA的含量。全自動生化分析儀測定肝功能各項指標。 3.結果3.1OLT大鼠手術成功的標準是手術結束后，大鼠即刻蘇醒、翻身，并能維持有效的呼吸、心跳。兩組有效肝移植大鼠例數(shù)各為30對。實驗組冷缺血時間控制在(51.1±3.2)min，無肝期為(20±2.2)min。各組經(jīng)腹主動脈灌注引起的肝臟熱缺血時間可以忽略不計(一般＜5秒)。一周存活率B組明顯高于A組(P＜0.05)。 3.2各組肝移植大鼠術后2

4、h，檢測顯示：A、B兩組肝功能各項均未見明顯差異，24hB組ALB顯著高于A組，TBIL、ALT、AST、ALP均顯著低于A組，48hTBIL、AST、ALP均顯著低于A組(P＜0.05)。 3.3兩移植組術后光鏡觀察均有不同程度的細胞水腫甚至死亡，肝板增厚，肝竇狹窄，肝細胞脂肪變性，但B組的改變要輕于A組，A組于24h后肝竇內出現(xiàn)淤積的紅細胞和血栓。電鏡觀察術后2hA組SEC出現(xiàn)斷裂，肝竇內有大量空泡形成，竇腔見血細胞淤積，B

5、組的改變與A組相似，核周長增加。24h后SEC腫脹，核增大，胞內見擴張的內質網(wǎng)、線粒體腫脹及空泡化，SEC向竇腔突出甚至脫落，但B組腫脹要輕于A組，線粒體未見明顯空泡化，核面積、周長、直徑與A組均有明顯差異(P＜0.05)，線粒體的OD下降但未有明顯差異(P＞0.05)。48h后A組SEC形態(tài)明顯改變，線粒體空泡化明顯，核異形性增加，胞質疏松水腫，易見致密包含體，部分SEC胞膜內陷出現(xiàn)調亡，脫落入竇腔，同壞死的SEC等組織填塞竇腔，B組

6、SEC明顯變性但無明顯死亡，外觀增大，線粒體數(shù)目明顯增多但腫脹不明顯，有SEC胞膜內陷，胞質疏松水腫，散見致密包含體，未見明顯壞死及竇腔填塞。SEC核面積、核周長、核直徑、細胞平均灰度及線立體OD值與A組均有明顯差異。 3.4正常肝臟HIF-1a蛋白均勻分布門靜脈和肝靜脈周圍細胞核和細胞質中，以細胞核中分布較多，極少量分布在中央靜脈周圍的內皮細胞中，無區(qū)帶差異。B組肝移植術后2h，HIF-1a在肝小葉呈I帶向Ⅲ帶逐漸加重的細胞漿

7、表達，SEC的表達強于肝細胞，中央靜脈周圍的SEC最為明顯，呈深褐色，陽性細胞數(shù)及染色面積較對照組有顯著增加，表達量明顯高于對照組(P＜0.01)及A組(P＜0.05)。術后24h的表達仍維持在較高水平，48hHIF-h的表達呈減退趨勢，在細胞凋亡與壞死的區(qū)域內，HIF-1a仍呈非差異性表達。A組術后24hHIF-1a的表達減少。48h后的表達已接近與正常水平，陽性細胞數(shù)及染色面積較B組均有明顯差異(P＜0.05)。 3.5術后

8、2hA、B組HA的水平均明顯增高(P＜0.05)，為血清正常水平的數(shù)倍，但B組HA的增高明顯低于A組。術后24h和48hA、B組的HA水平均明顯下降，到48hB組雖仍高于正常水平，但與正常值無明顯差異，而A組的血清水平仍高于正常(P＜0.05)。而實驗中除A組術后24h的盯-1值較正常值明顯增高外(P＜0.05)，其余各組均未見明顯差異。 4.結論肝移植后大鼠一周存活率與供肝的缺血缺氧-再灌注損傷時程度呈負相關，HP對移植肝臟具