弓形蟲(chóng)可溶性速殖子抗原的免疫原性蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf

1、目的:剛地弓形蟲(chóng)是人和動(dòng)物感染率極高的一種機(jī)會(huì)致病原蟲(chóng)，其中速殖子階段是主要的致病階段。速殖子的大規(guī)模全蛋白質(zhì)組學(xué)分析仍然還在進(jìn)行，但目前尚無(wú)弓形蟲(chóng)的完全蛋白質(zhì)組圖。所以本研究應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析剛地弓形蟲(chóng)可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen，STAg)組分，尋找具有免疫原性的抗原，為弓形蟲(chóng)疫苗有效候選抗原研究提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:常規(guī)復(fù)蘇弓形蟲(chóng)速殖子，腹腔接種BALB/c小鼠，轉(zhuǎn)種3次

2、恢復(fù)其活力，收集腹腔沖洗液，純化，離心，上清液即為STAg，用三氯醋酸丙酮沉淀法制備2-DE樣品。STAg樣品，通過(guò)等電聚焦和SDS-PAGE電泳技術(shù)分離獲得弓形蟲(chóng)STAg組分全蛋白點(diǎn)，用兔抗弓形蟲(chóng)血清和兔純血清(陰性對(duì)照)做免疫印跡獲得免疫原性的蛋白點(diǎn)。切取這些點(diǎn)、進(jìn)行膠內(nèi)酶解，ABI4700質(zhì)譜儀對(duì)蛋白點(diǎn)進(jìn)行鑒定分析。 結(jié)果: 2-DE凝膠圖顯示1227個(gè)蛋白斑點(diǎn)，經(jīng)質(zhì)譜對(duì)其鑒定，得到230個(gè)弓形蟲(chóng)蛋白點(diǎn)，Western b

3、lot檢測(cè)顯示，16個(gè)蛋白點(diǎn)具有免疫原性。這些蛋白點(diǎn)中，主要表面抗原1(SAG1，4個(gè)斑點(diǎn))曾有報(bào)道具有免疫原性，熱休克蛋白70(Hsp70)的免疫原性尚存在爭(zhēng)議，其余的這些蛋白點(diǎn);假定的蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(putative protein disulfide isomerase)，冠蛋白(coronin)，熱休克蛋白60(Hsp60)，丙酮酸激酶(pyruvate kinase)2個(gè)點(diǎn)斑點(diǎn)，谷氨酸脫氫酶(glutamate dehyd

4、rogenase，putativ)，，蛋白激酶C受體1(receptor for activated C kinase 1)，蘋(píng)果酸脫氫酶(malate dehydrogenase)，尿苷磷酸化酶(uridine phosphorylase)2個(gè)斑點(diǎn)和過(guò)氧化氧化還原蛋白(peroxiredoxin)都具有免疫原性均為本研究新發(fā)現(xiàn)。 結(jié)論:對(duì)所得到的16個(gè)陽(yáng)性蛋白點(diǎn)進(jìn)行分析，除SAG1(P30)和Hsp70外，其余9種具有免疫原性