hFXYD6蛋白在肝癌組織中的表達及hFXYD6抗體對HepG2細胞生長的影響機制.pdf

1、探索肝癌的腫瘤標志物及其生物治療靶點是提高肝癌診療療效的不可忽視關鍵因素。本課題組前期研究證實人FXYD6為膽管癌分化相關抗原，研制了兔抗人FXYD6抗體，發(fā)現(xiàn)FXYD6蛋白在膽管癌和胰腺癌組織有高水平的表達。為深入研究FXYD6基因蛋白在肝癌組織中的表達和FXYD6抗體對于肝癌細胞生長的影響奠定了基礎。
　　 目的：
　　 1.觀察研究人FXYD6基因在正常肝臟、肝硬化組織和肝癌組織中的差異性表述，檢測該基因蛋白對于肝

2、癌的病理輔助診斷價值。
　　 2.探討抗人FXYD6抗體對HepG2肝癌細胞體外生長的影響及其機制。
　　 方法：
　　 1.采用免疫組織化學染色方法顯示FXYD6蛋白在人正常肝臟(n=8)、癌旁的肝硬化組織和肝癌組織(n=40)中的表達，用組織切片自動掃描分析儀(OlympusBX-61 U—PMTVC4M2532)聯(lián)合Applied Imaging軟件對FXYD6蛋白的表達進行自動定量分析。
　　 2

3、.采用葡萄糖消耗實驗和MTT實驗檢測抗人FXYD6抗體對于人HepG2肝癌細胞體外生長的影響。采用Northern blot技術、Western blot技術探討FXYD6抗體對于肝癌細胞影響作用機制。
　　 3.統(tǒng)計處理時，計量資料以均數(shù)±標準差表示，應用配對資料t檢驗進行統(tǒng)計學分析，統(tǒng)計學處理應用EXCELL進行均數(shù)和標準差統(tǒng)計，用CHISS統(tǒng)計分析軟件進行F檢驗分析。P<0.05表示為有顯著性統(tǒng)計學意義，p<0.01表示差

4、異非常顯著。
　　 結果：
　　 1.FXYD6蛋白棕黃色染色顆粒位于胞膜和胞漿，以胞漿為主。FXYD6胞漿陽性細胞率在肝癌、肝硬化組織及正常肝臟組織依次顯著性的降低(p=0.000)。FXYD6蛋白的表達水平以細胞FXYD6蛋白陽性染色密度值表示，即FXYD6陽性細胞數(shù)百分率和著色胞漿密度的乘積，在肝癌組織、肝硬化組織和正常肝臟組織順次顯著性的降低(p=0.000)。
　　 2.細胞培養(yǎng)液內(nèi)的FXYD6抗體為1

5、：200時，葡萄糖消耗和MTT實驗提示HepG2細胞的糖消耗和細胞生長均受到明顯的抑制。與對照組或FXYD6反義DNA組比較，F(xiàn)XYD6抗體能顯著的抑制HepG2細胞的增殖生長，F(xiàn)XYD6抗體聯(lián)合應用FXYD6反義DNA對于HepG2細胞的抑制作用和FXYD6抗體的抑制作用無顯著性的區(qū)別。
　　 3.和含有FXYD6抗體的培養(yǎng)液培養(yǎng)后，HepG2細胞內(nèi)的Fxyd6mRNA的水平在培養(yǎng)后第3天明顯降低；Western印跡實驗中，當

6、培養(yǎng)液中FXYD6抗體濃度為50μl/ml時，HepG2細胞內(nèi)的表達的FXYD6蛋白明顯的低于其他處理組。
　　 結論：
　　 1.首次發(fā)現(xiàn)FXYD6與肝癌分化相關，從正常肝臟組織、肝硬化組織到肝癌組織，F(xiàn)XYD6蛋白表達量依次顯著性遞增。
　　 2.FXYD6抗體在適當?shù)臐舛认履芤种企w外培養(yǎng)的HepG2肝癌細胞的糖消耗量，抑制肝癌細胞的增殖和生長。但這種抑制作用無劑量一效應關系。
　　 3.抗人FXYD