肝細胞ABCB4基因與膽囊膽固醇結石關系的研究.pdf

1、目的：探討膽囊膽固醇結石的形成與ABCB4基因表達的相關性，為研究膽囊膽固醇結石的成因從分子水平提供新的依據(jù)，以及為進一步研究預防膽囊膽固醇結石提供新的理論基礎。 方法：以膽囊膽固醇結石患者的肝臟組織14例作為實驗組（男性9例，女性5例，平均年齡49歲），以非膽囊結石患者的肝臟組織10例為對照組（男性5例，女性5例，平均年齡45歲）。兩組入選患者均不伴有膽管結石。膽囊膽固醇結石組均為手術中證實的膽囊結石患者；取出的膽囊結石需進一

2、步經(jīng)紅外光譜法進行成分分析，其膽固醇含量大于70%者方認定為膽囊膽固醇結石。非膽囊結石組為經(jīng)過手術前腹部B超及手術中證實為無膽囊結石存在的患者。兩組入選患者均需排除心血管系統(tǒng)疾病、高脂血癥、糖尿病、甲狀腺疾病、妊娠、服用避孕藥物、惡性腫瘤，以及肝腎疾病等疾病存在。實驗方法分為以下兩個環(huán)節(jié)：①提取結石組和對照組肝臟組織的RNA，應用逆轉錄—聚合酶鏈反應（RT—PCR）技術檢測兩組患者肝臟組織的ABCB4基因表達的強度；②提取結石組和對照組

3、肝臟組織，冰凍切片后用免疫組織化學染色方法檢測兩組患者肝臟組織P—糖蛋白Pgp3的表達強度。 結果：⑴電泳結果顯示：實驗中所有擴增產(chǎn)物都出現(xiàn)了內參β—actin基因的328bp擴增帶和ABCB4基因的289bp擴增帶，膽囊膽固醇結石組ABCB4基因擴增帶亮度明顯弱于對照組。半定量結果分析：利用Quantity One軟件計算比較每一泳道中PCR產(chǎn)物條帶的光密度值，計算ABCB4基因與β—actin條帶的光密度的相對比值，通過比較

4、各樣本ABCB4基因的相對值，最終得出ABCB4基因在肝臟組織中mRNA表達的相對含量。半定量結果的相對光密度值需每組每一實驗對象同等處理條件下均重復測定3次，取其最終平均值作為統(tǒng)計用數(shù)據(jù)。最后結果顯示：膽囊膽固醇結石組患者ABCB4基因mRNA表達較低（0．9075±0．0606），對照組患者ABCB4基因mRNA表達則高（1．1538±0．0420），表達差異顯著，有統(tǒng)計學意義（t=—11．062 P<0．05）。⑵免疫組織化學染色

5、結果顯示：在高倍物鏡下肝細胞膜的毛細膽管出現(xiàn)棕黃色染色顆粒為陽性細胞。每張切片隨機選取5個視野，每個視野內觀察100個細胞，陽性細胞≥10%為陽性，否則為陰性。利用四格表的Fisher確切概率法檢驗結果示：膽囊膽固醇結石組患者Pgp3表達陽性率為14．29%（2/14），對照組患者Pgp3表達陽性率為80%（8/10）。兩組之間的差異有統(tǒng)計學意義（X2=9．932 P<0．05）。 結論：①膽囊膽固醇結石患者的ABCB4基因mR