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文檔簡介
1、背景:
越來越多的證據表明炎癥在冠心病(coronary heart disease, CHD)的發(fā)生、發(fā)展和預后過程中起很重要的作用。多種炎癥因子與冠心病的關系是冠心病研究領域的一個熱點,揭示炎癥因子與冠心病的關系有重要臨床意義。多種炎癥因子(如C反應蛋白、腫瘤壞死因子-α、白介素-6等)在冠心病中都有不同程度的合成增加。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor–α, TNF-α)通過增加內皮細胞的促凝活
2、性,促進由活化白細胞介導的內皮細胞的病理損傷和功能改變,引起炎癥及損傷;從而引起斑塊的穩(wěn)定性下降、斑塊破裂,導致急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome, ACS)的發(fā)生。血管內血栓形成是很多疾病共同的病理過程,它涉及了凝血與抗凝系統、纖溶系統間的動態(tài)平衡。組織因子途徑在生理性止血與病理性血栓形成過程中具有極其重要的意義。組織因子途徑抑制物(tissue factor pathway inhibitor, TFPI
3、)是體內的主要抗凝物質,分為組織因子途徑抑制物-1(TFPI-1)和組織因子途徑抑制物-2(TFPI-2)。本試驗即是探討炎癥因子TNF-α對人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)表達組織因子途徑抑制物-2的影響及其通路。
目的:
觀察TNF-α(20ng/mL)、ERK抑制劑PD98059(10umol/L)、NF-κB抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯
4、烷(pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC)(50umol/L)處理后,人臍靜脈內皮細胞TFPI-2表達的變化,探討TNF-α對內皮細胞對TFPI-2的合成和表達的調節(jié)機制,進而探討其通路。
方法:
(1)體外培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞:人原代臍靜脈內皮細胞(HUVEC)及低血清培養(yǎng)基購自美國Cascade Biologics公司。細胞復蘇后于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),經傳代,凍存,所
5、用細胞為3-4代。
(2)人臍靜脈內皮細胞分為單純培養(yǎng)基對照組、TNF-α組、PD組、PDTC組。TFPI-2蛋白測定采用Western blot法,TFPI-2 mRNA測定采用real time RT-PCR法。
結果:
(1)TNF-α可顯著上調TFPI-2蛋白的含量(P<0.01),ERK抑制劑PD、NF-κB抑制劑PDTC可使TFPI-2蛋白含量降低(P<0.05)。
(2)TNF-α可
6、顯著上調TFPI-2 mRNA的表達(P<0.01),ERK抑制劑PD、NF-κB抑制劑PDTC抑制TFPI-2 mRNA合成(P<0.05)。
結論:
(1)TNF-α可以明顯上調TFPI-2的表達,對炎癥刺激促進血栓形成有一定的保護作用;
(2)ERK抑制劑PD及NF-κB抑制劑PDTC均抑制TFPI-2合成,證實MAPK信號轉導途徑(ERK)及核轉錄因子NF-κB對TFPI-2的正向調節(jié)作用;
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