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文檔簡介
1、目的:
探討α-AR阻滯劑和β-AR阻滯劑對ET-1介導的HSCs收縮的影響,為β-AR阻滯劑聯(lián)用α-AR阻滯劑降低肝硬化門脈高壓提供新的理論依據(jù)。
方法:
1體外培養(yǎng)HSCs,Western blot檢測HSCs AR蛋白的表達;免疫細胞化學法檢測腎上腺素受體亞型在HSCs的分布與定位。
2應用激光共聚焦顯微鏡(laser confocal scanning microscope,LSCM),采
2、用第三代鈣熒光探針Fluo-3/AM觀察α-AR阻滯劑(酚妥拉明)、非選擇性β-AR阻滯劑(普萘洛爾)、β1-AR阻滯劑(美托洛爾)及β2-AR阻滯劑(ICI-118551)對正常HSCs以及ET(1.1×10-9 mol·L-1)介導下的HSCs[Ca2+]i熒光強度、細胞面積及最大長徑變化的影響。
3計量資料數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差(x±S)表示,用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析,以P﹤0.05作為差異顯著性標準。
3、 結果:
1 Western blot證實HSCs表達α-AR、β1-AR、β2-AR分別在大約57 kD、50 kD、47 kD位置出現(xiàn)α-AR、β1-AR、β2-AR特異性條帶。
2免疫細胞化學法證實HSCs可以表達α-AR、β1-AR、β2-AR,且α-AR、β1-AR、β2-AR在HSCs中的分布基本一致,主要分布于細胞漿,細胞膜也有少量表達。
3除β1-AR阻滯劑美托洛爾外,其余各AR阻滯劑能夠導
4、致HSCs[Ca2+]i顯著下降(P<0.05);但各AR阻滯劑對HSCs收縮無顯著影響。
4 ET-1能夠引發(fā)的HSCs[Ca2+]i瞬間而短暫的升高,且出現(xiàn)HSCs面積及最大直徑顯著減小,EC50值約在1.1×10-9mol?L-1。
5除β1-AR阻滯劑美托洛爾外,其余各AR阻滯劑能夠顯著抑制ET-1引起的HSC內(nèi)Ca2+濃度升高及收縮作用(P<0.05),其中β2-AR阻滯劑(ICI11-8551)組和α+β
5、-AR阻滯劑(酚妥拉明+普萘洛爾)阻滯劑組作用最顯著。
結論:
1 HSCs可以表達α-AR、β1-AR和β2-AR腎上腺素受體蛋白主要分布于HSCs的細胞漿,細胞膜也有少量表達。
2普萘洛爾、酚妥拉明、ICI-118551不僅能夠引起HSC[Ca2+]i下降,還能夠抑制ET-1介導的HSCs收縮,以ICI-118551及酚妥拉明+普萘洛爾聯(lián)用時用更強。
3β1-AR阻滯劑美托洛爾既不能夠引起HS
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