布氏桿菌LPS抗原及其單克隆抗體的制備與純化.pdf

1、布氏桿菌(Brucella Blues)是革蘭氏陰性需氧桿菌，可引起人畜共患的布氏桿菌病，給世界各國畜牧業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失，同時也給人類健康造成極大的危害。該病目前尚不能完全根治，所以預防和檢測顯得尤為重要。
　　本研究采用改良熱酚法制備純化布氏桿菌M5株的脂多糖（LPS），檢測細菌LPS免疫原性；純化的細菌LPS免疫BALB/c小鼠，通過DOT-ELISA測定血清抗體效價。結(jié)果表明采用熱酚法能獲得較高純度的細菌LPS，其免疫

2、原性較高，DOT-ELISA檢測的血清效價達到1:106，與全菌免疫原性接近。
　　在此基礎之上，將LPS免疫的BALB/c小鼠脾細胞和SP2/0細胞進行融合，制備雜交瘤細胞，采用間接ELISA法進行陽性篩選，經(jīng)過三次篩選和3-4次細胞克隆化培養(yǎng)，獲得四株穩(wěn)定分泌抗體的雜交瘤細胞株，采用間接ELISA法分別測定其細胞上清抗體效價，分別達到1:104，1:105，1:105，1:105。對四株細胞的上清液進行Tricine-SDS-

3、PAGE鑒定，上清中同時出現(xiàn)了細胞培養(yǎng)液中沒有的蛋白，即為單克隆抗體目的蛋白。測定單克隆抗體的相對親和力和穩(wěn)定性，結(jié)果顯示其相對親和力分別為24.13μg/mL，24.65μg/mL，24.95μg/mL，23.16μg/mL，且具有良好的穩(wěn)定性。對細胞上清采用硫酸銨鹽析法初步純化，再采用親和層析法對單抗進一步純化，純化的蛋白進行效價測定和Tricine-SDS-PAGE鑒定，結(jié)果表明純化后四株細胞的單抗效價略有降低，但仍可達1:104