動脈粥樣硬化兔主動脈平滑肌細胞鈣激活鉀通道活性的變化及前列腺素E-,1-對其影響的研究.pdf

1、目的：動脈粥樣硬化（AS）的形成機制和病理生理過程十分復雜。目前認為AS，尤其是粥樣斑塊形成時，血管通常以重塑（remodeling）機制發(fā)生代償性擴張，但代償性擴張的確切機制尚未完全闡明。血管平滑肌細胞鈣激活鉀通道（Kca）參與細胞膜動作電位的復極，對維持血管張力具有重要的作用。至于AS形成過程中，血管平滑肌細胞Kca通道的電生理特性如何變化，鮮見報道。本實驗利用膜片鉗單通道記錄技術研究（1）AS兔主動脈平滑肌細胞Kca通道活性的變化

2、，旨在從分子水平上探討AS血管代償性擴張的可能機制和深化對AS形成的病理生理過程的認識。（2）前列腺素E1（PGE1）對Kca通道活動的影響，以從分子水平上探討AS時PGE1的擴血管機制和意義。方法：(1)將20只健康的新西蘭白兔隨機分為對照（Control）組和模型（AS）組，每組各10只，雌雄不拘，體重1.0±0.15kg，月齡3–4個月。(2)AS組喂高脂飼料（0.5％膽固醇+5％豬油+15％蛋黃粉+79.5％普通飼料），3周后去

3、除飼料中的膽固醇，再喂養(yǎng)5周；Control組只喂普通飼料，持續(xù)喂養(yǎng)8周。(3)用酶消化法獲取單個主動脈平滑肌細胞，通過膜片鉗單通道記錄技術檢測AS兔主動脈平滑肌細胞Kca通道的活性。在浴液中分別加入不同濃度的Ca2+（10-8、5×10-8、10-7、5×10-7、10-6M）和PGE1(10-9、5×10-9、10-8、5×10-8、10-7M)，以Pclamp7.0應用軟件實時采樣記錄通道的開放概率（Po）、平均開放時間（To）、

4、平均關閉時間（Tc）和電流幅值（Am），以藥前作對照觀察上述參數(shù)的變化。結(jié)果：(1)Kca通道的活性：在細胞吸附式膜片（cell–attached patch）和內(nèi)面向外式膜片（inside–outside patch）下，Control組和AS組Kca通道的開放均具有明顯的電壓依賴性。與Control組比較，AS組Kca通道的活性明顯增加。在對稱性高鉀溶液中，當膜電位鉗制為+40mV時，利用cell–attached patch觀察，

5、Control組和AS組Po分別為0.0316±0.0205和0.2401±0.1215(P<0.05)(n=10)，Tc為238.752±203.253ms和19.861±12.524ms(P<0.001)(n=10)，電導為205.650±37.125pS和195.225±42.825pS(P＞0.05)(n=10)，To和Am變化均無顯著性差異(P＞0.05)(n=10)。在inside–outside patch下，Contro

6、l組和AS組Po分別為0.0183±0.0085和0.1652±0.0764(P<0.01)(n=10)，Tc為432.147±192.637ms和52.193±19.880ms(P<0.001)(n=10)，To為6.635±2.523ms和8.0296±2.153ms(P<0.05)(n=10)，電導為258.850±15.475pS和262.025±63.450pS(P＞0.05)(n=10)，Am變化均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05

7、)(n=10)。(2)Kca通道的鈣敏感性：利用inside–outside patch觀察，Control組和AS組Kca通道均具有明顯的鈣敏感性，并呈濃度依賴性。但與Control組比較，AS組的鈣敏感性下降。在對稱性高鉀溶液中，當膜電位鉗制為+40mV時，在浴液中加入不同濃度的Ca2+（10-8、5×10-8、10-7、5×10-7、10-6M），Control組Po由加Ca2+前0.0183±0.0085分別增加到0.0219±

8、0.0108(P＞0.05)、0.0465±0.0190(P＞0.05)、0.1002±0.0240(P<0.05)、0.1605±0.0651(P<0.01)和0.3901±0.0812(P<0.01)(n=10)，AS組Po由加Ca2+前0.1652±0.0764分別增加到0.1901±0.0807(P＞0.05)、0.3520±0.0686(P＞0.05)、0.6014±0.0471(P<0.05)、0.7081±0.0338(P

9、<0.01)和0.8421±0.0318(P<0.01)(n=10)。與加Ca2+前比較，Control組Po增加了22.3509±9.4338倍，而AS組僅增加了5.3111±0.4180倍(P<0.01)。(3) PGE1對Kca通道活動的影響：在inside-outside patch下，PGE1可明顯激活Control組和AS組Kca通道，并具有濃度依賴性。但AS組對PGE1的反應性低于Control組。在對稱性高鉀溶液中，當膜

10、電位鉗制為+40mV時，在浴液中加入不同濃度的PGE1（10-9、5×10-9、10-8、5×10-8、10-7M），Control組Po由加藥前0.0183±0.0085分別增加到0.0188±0.0069(P＞0.05)、0.0450±0.0119(P<0.05)、0.0563±0.0155(P<0.01)、0.1118±0.0315(P<0.01)和0.2533±0.0569(P<0.001)(n=10)，AS組Po由加藥前0.1

11、652±0.0764分別增加到0.1830±0.0617(P＞0.05)、0.3247±0.1326(P<0.05)、0.5244±0.1614(P<0.01)、0.6798±0.1817(P<0.01)和0.8056±0.1937(P<0.001)(n=10)。與加藥前比較，Control組Po增加了14.8129±3.4079倍，而AS組僅增加了5.1443±2.8612倍(P<0.01)。結(jié)論：(1)AS血管平滑肌細胞Kca通道的