炭疽桿菌保護性抗原的克隆表達、純化及鑒定.pdf

1、目的：選擇編碼炭疽桿菌保護性抗原PA(protectiveantigen)的基因Pag,以炭疽桿菌A16R菌株為模板，克隆炭疽桿菌Pag基因，構建表達載體并在原核細胞中進行功能性表達，為炭疽桿菌亞單位疫苗的研制提供基礎。 方法：參考Pet-32a載體序列多克隆位點，根據(jù)Pag基因序列設計引物，通過聚合酶鏈反應技術(PCR)獲得目的片段，測序正確后構建到原核表達載體Pet-32a，構建載體命名Pet-32a-PA。轉化至大腸桿菌B

2、L21(DE3)中進行表達，通過ELISA和Western-Blot等方法進行特異性鑒定。 結果：構建出Pet-32a-PA表達載體，經(jīng)DNA序列分析和雙酶切鑒定證實質粒構建正確，并均能在大腸桿菌BL21(DE3)中進行表達內表達。其表達形式為包涵體，經(jīng)過變性、純化、復性后通過ELISA和Western-Blot證實得到了具有活性的PA蛋白。 結論：成功構建出Pet-32a-PA表達載體，其蛋白表達產(chǎn)物經(jīng)過復性后具有活性