靶向Tie2的siRNA聯(lián)合卡鉑對(duì)子宮內(nèi)膜癌裸鼠移植瘤作用的研究.pdf

1、背景及目的：目前在抗癌研究中，通過(guò)阻斷腫瘤血管生成來(lái)治療腫瘤已經(jīng)成為腫瘤治療領(lǐng)域的最有前景的途徑之一。本研究主要觀察Tie2 siRNA聯(lián)合卡鉑對(duì)子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)的抑制作作用。
　　方法：應(yīng)用擴(kuò)增培養(yǎng)的Ishikawa細(xì)胞株建立子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤模型。待腫瘤體積達(dá)到50mm3(約造模后2周)后，隨機(jī)將25只荷瘤裸鼠分為5組(每組5只)，分別為空白對(duì)照組(5％葡萄糖，G組)、陰性質(zhì)粒組(pRNAT-CMV3.2-N

2、eo-N-siRNA，N組)、卡鉑組(伯爾定射液，C組)、Tie2質(zhì)粒組(pRNAT-CMV3.2-Neo-Tie2-siRNA，T組)、聯(lián)合組(伯爾定注射液+Tie2-siRNA，A組)。分別應(yīng)用5％葡萄糖(0.2ml·只-1)、陰性質(zhì)粒(20ug.只-1)、伯爾定注射液(25.0mg·kg-1，5％葡萄糖溶解稀釋)、Tie2質(zhì)粒(20ug·只-1)和伯爾定注射液(25.0 mg·kg-1)+Tie2質(zhì)粒(20ug·只-1)瘤體內(nèi)注射

3、治療。每3天次，共6次，于最后一次治療后3天處死所有裸鼠。治療過(guò)中，觀察統(tǒng)計(jì)移植瘤體積變化，計(jì)算抑瘤率；實(shí)時(shí)定量PCR(real time quantitative Polymerase Chain Reaction，realtime PCR)和Western Blotting方法檢測(cè)裸鼠移植瘤組織中Tie2 mRNA和蛋白表達(dá)。免疫組織化學(xué)技術(shù)利用CD34抗體測(cè)定腫瘤微血管密度(Tumor microvessel density，MV

4、D)，分析每組腫瘤組織中的腫瘤血管抑制情況。
　　結(jié)果：子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤體積達(dá)到50mm3大約需要10-14天的時(shí)間。G組、N組、C組、T組及A組五組最后的腫瘤體積分別為(905.05±74.84)mm3、(937.65±103.09)mm3、(312.99±59.50)mm3、(384.77±76.71)mm3、(66.11±21.81)mm3。與G組和N組相比，C組、T組及A組的腫瘤生長(zhǎng)明顯受到抑制，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

5、P<0.05)。與G組相比，C組、T組及A組的平均抑瘤率分別為(65.28±6.46)％、(56.95±10.85)％、(92.61±2.54)％，且C組、T組及A組中 Tie2 mRNA和蛋白的表達(dá)水水平明顯降低(P<0.05)。微血管密度分析顯示，C組、T組及A組的腫瘤血管數(shù)量明顯比G組和N組少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：靶向Tie2的siRNA可有效沉默Tie2的表達(dá)，顯著抑制人子宮內(nèi)膜癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)，