慢病毒介導BMPRⅡ基因沉默對人肝癌移植瘤生長的影響.pdf

1、目的：
　　探討B(tài)MPR II基因RNA干擾（RNAi）的重組慢病毒載體對人肝癌HepG2細胞裸鼠移植瘤BMPR II基因表達和移植瘤生長的影響。
　　方法：
　　1、前期研究已明確了具有下調(diào) BMPR II基因的siRNA干擾序列，設計并合成shRNA oligo,退火后構建入干擾慢病毒載體pL/shRNA/F-BMPR II，用構建的慢病毒載體pL/shRNA/F-BMPR II轉染293T細胞，包裝慢病毒，并用熒

2、光法測定滴度，用包裝的pL/shRNA/F-BMPR II干擾慢病毒侵染HepG2細胞。
　　2、通過實時定量逆轉錄聚合酶鏈反應(qRT-PCR)、蛋白印跡（Western Blot）技術檢測慢病毒轉染后各組細胞中BMPR II mRNA及蛋白水平表達的變化，明確處理后BMPR II沉默的效果。
　　3、建立人肝癌HepG2細胞裸鼠移植瘤模型，隨機分成實驗組、陰性對照組和空白對照組。隔天1次向各組動物腫瘤內(nèi)分別注射BMPR

3、II shRNA慢病毒顆粒、攜帶無效序列的慢病毒顆粒和0.9％氯化鈉溶液0.2 ml，共5次，測量各組腫瘤體積的大小，繪制腫瘤生長曲線，13天后處死裸鼠。
　　4、應用Western blot及免疫組化技術檢測移植瘤中BMPR II蛋白水平表達。
　　結果：
　　1、qRT-PCR及Western bolt檢測結果顯示：轉染組與空白對照組及陰性對照組相比，BMPR II mRNA及蛋白表達水平明顯下調(diào)，差異有統(tǒng)計學意義

4、（P<0.05）。
　　2、繪制裸鼠移植瘤生長曲線顯示，與空白對照組和陰性對照組相比，實驗組腫瘤生長速度明顯減慢（P<0.05）；空白對照組和陰性對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）?？瞻讓φ战M和陰性對照組剝脫的瘤體體積分別為（1274.6±133.02）mm3和（1255.2±130.05） mm3，而實驗組剝脫的瘤體體積為（328.6±87.72） mm3
　　3、Western blot及免疫組化技術檢測顯示：

5、實驗組與空白對照組及陰性對照組相比，移植瘤組織 BMPR II蛋白表達明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），而空白對照組和陰性對照組移植瘤組織相比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　結論：
　　1、BMPR II shRNA慢病毒載體轉染入人肝癌HepG2細胞后，可有效抑制BMPR-ⅡmRNA及蛋白在細胞內(nèi)的表達。
　　2、BMPR II shRNA慢病毒載體瘤內(nèi)注射可抑制人肝癌HepG2細胞裸鼠移植瘤的生