鼻咽癌耐藥細(xì)胞株14-3-3σ表達(dá)研究.pdf

1、目的:研究14-3-3σ基因在鼻咽癌細(xì)胞株HNE1和耐順鉑的鼻咽癌細(xì)胞株HNE1-DDP中的表達(dá)及其啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化情況，初步探討14-3-3σ基因與耐藥的關(guān)系。
　　 方法:首先采用蛋白印跡法(Western Blotting)檢測(cè)HNE1-DDP細(xì)胞與HNE1細(xì)胞14-3-3σ的表達(dá)，并采用熒光定量PCR(QuantitativePCR，qPCR)檢測(cè)14-3-3σ基因的mRNA表達(dá)水平。然后利用甲基化抑制劑5-雜氮-2'

2、-脫氧胞苷處理HNE1-DDP細(xì)胞，觀察不同濃度對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)及細(xì)胞周期的影響，并采用Western Blotting及qPCR分別檢測(cè)藥物干預(yù)前后14-3-3σ基因表達(dá)的改變。用Western Blotting檢測(cè)p53蛋白在HNE1及HNE1-DDP中的表達(dá)，并采用亞硫酸氫鈉處理后測(cè)序法(Bisulfite genomic sequencing PCR)檢測(cè)14-3-3σ啟動(dòng)子區(qū)域CpG位點(diǎn)的甲基化情況。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行

3、數(shù)據(jù)分析。
　　 結(jié)果:較HNE1細(xì)胞，14-3-3σ蛋白及其mRNA、p53蛋白在HNE1-DDP細(xì)胞株中表達(dá)均明顯下降。經(jīng)過不同濃度的5-aza-2'-dC(0，1，5，10μmol/L)處理HNE1-DDP細(xì)胞后，細(xì)胞生長(zhǎng)曲線出現(xiàn)明顯差異，細(xì)胞活性抑制，細(xì)胞阻滯在S期和G2-M期。同時(shí)，隨著藥物的處理，HNE1-DDP細(xì)胞的14-3-3σ蛋白和mRNA重新表達(dá)并逐漸上升。此外，親本細(xì)胞株HNE1、耐藥細(xì)胞株HNE1-DDP

4、及處理后的細(xì)胞株中，14-3-3σ啟動(dòng)子區(qū)域的CpG位點(diǎn)幾乎均為非甲基化狀態(tài)。
　　 結(jié)論:14-3-3σ下調(diào)與鼻咽癌耐藥相關(guān)，提示14-3-3σ可能是鼻咽癌耐藥相關(guān)的蛋白。5-aza-2'-dC具有抑制鼻咽癌耐藥細(xì)胞株生長(zhǎng)、阻滯耐藥細(xì)胞株周期和上調(diào)14-3-3σ的作用，且14-3-3σ可能也參與了藥物的抑制作用。但在鼻咽癌耐藥細(xì)胞株HNE1-DDP中14-3-3σ表達(dá)下調(diào)可能不是由于其甲基化所致，而和抑瘤蛋白p53的表達(dá)下降有