CD151在調(diào)控血管形成中促進內(nèi)皮細胞粘附維持血管穩(wěn)定性的機制研究.pdf

1、目的：在以往研究CD151促進體內(nèi)外血管形成的基礎(chǔ)上,進一步探討其在對皮細胞-細胞粘附連接形成及連接穩(wěn)定性維持的作用,闡明CD151促進體外血管再生維持新生血管穩(wěn)定性的機制。
　　方法：1.將CD151、CD151-QRD突變體(整合素結(jié)合缺陷)、CD151-ARSA突變體(囊泡運輸缺陷)和anti-CD151片斷分別插入重組腺相關(guān)病毒(rAAV)載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒,并將GFP插入重組腺相關(guān)病毒(rAAV)載體作對照,轉(zhuǎn)染人臍靜脈

2、內(nèi)皮細胞,48小時后檢測CD151蛋白的表達;2.細胞聚集實驗檢測細胞-細胞粘附能力;3.劃痕實驗檢測人臍靜脈內(nèi)皮細胞遷移率;4.趨化小室檢測內(nèi)皮細胞對matrigel基質(zhì)侵襲力;5.Matrigel上的管腔形成實驗評價各研究組血管形成能力以及新生血管的穩(wěn)定性維持的差異;6.信號通路的研究,進一步探討CD151維持內(nèi)皮細胞血管穩(wěn)定性的機制。
　　結(jié)果：1.成功轉(zhuǎn)染各組質(zhì)粒,實現(xiàn)對目的基因的表達調(diào)控。CD151組、QRD組、ARSA

3、組CD151蛋白的表達顯著高于GFP組和正常對照組,anti-CD151組CD151蛋白表達則顯著減少,明顯低于GFP組和正常對照組;2.CD151促進內(nèi)皮細胞-細胞間粘附聚集的作用顯著高于其他各組,而這一作用在QRD組、ARSA組被削弱,anti-CD151組中內(nèi)皮細胞-細胞間的粘附受到抑制,并且這一作用可被E-cadherin阻斷劑阻斷。3.CD151能夠明顯促進內(nèi)皮細胞的定向遷移、對胞外基質(zhì)的侵襲、促進血管再生并維持新生血管的穩(wěn)定

4、性,這些作用在QRD組、ARSA組被削弱,anti-CD151組中這一作用顯著受抑;4.CD151表達增加,下游信號分子RhoA,Rac,cdc42激活增加,FAK磷酸化增加,這一作用在CD151-QRD突變體及CD151-ARSA突變體中均被削弱。抑制CD151表達,RhoA,Rac,cdc42活化被抑制,FAK磷酸化顯著減少。
　　結(jié)論：研究表明,CD151與整合素結(jié)合形成復合體,促進內(nèi)皮細胞-細胞粘附、定向遷移和侵襲,促進內(nèi)