NF-κB及COX-2在急性酒精性肝損傷動(dòng)物模型中表達(dá)及機(jī)制的探討.pdf

1、目的:本研究通過在短時(shí)期內(nèi)給予大量酒精灌胃的方法建立急性酒精性肝損傷的動(dòng)物模型，并同時(shí)給予腹腔內(nèi)注射NF-κB阻斷劑PDTC，探討在PDTC干預(yù)下大鼠急性酒精性肝損傷中NF-κB及COX-2的作用機(jī)制以及對(duì)TNF-α表達(dá)的影響。
　　方法:1、干預(yù)組每天禁食不禁水12小時(shí)后給予濃度為55％酒精，8g/kg.d，一天分2次灌胃，于酒精灌胃第三天起，于酒精灌胃前30分鐘給予 PDTC腹腔注射50mg/kg.d，共1周，模型組于酒精灌胃

2、第三天起，給予相同容積生理鹽水腹腔注射，余操作同干預(yù)組。對(duì)照組通過給予相同容積的生理鹽水灌胃及腹腔內(nèi)注射。實(shí)驗(yàn)第1周和第2周末行灌胃后于12小時(shí)后分別處死，并左心室采血分離血清待測(cè)生化指標(biāo)，采血后立即取肝組織用福爾馬林固定，做病理、免疫組織化學(xué)檢測(cè)。
　　2、利用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清ALT和AST值，肝臟組織常規(guī)做石蠟包埋，并且切片行 HE染色和免疫組化染色（SABC法），并且密切觀察肝臟組織病理變化和NF-kB、TNF-α以

3、及COX-2的表達(dá)和分布。
　　結(jié)果:1.大鼠血清中ALT、AST值的比較：于實(shí)驗(yàn)第1周和第2周，模型組與對(duì)照組以及干預(yù)組與模型組比較血清中ALT和AST值均明顯有變化；具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；在模型組第1周與第2周比較中可看出血清ALT和AST值均明顯升高，AST/ALT比值＞2；具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　2.病理學(xué)檢查：HE染色結(jié)果：實(shí)驗(yàn)第1周和第2周，模型組與對(duì)照組相比較而言，肝臟細(xì)胞腫脹明顯，可見

4、到大小不等的脂肪空泡，有些部分還可見到灶壯壞死，炎癥細(xì)胞浸潤，隨造模時(shí)間延長模型組病變加重。PDTC干預(yù)組較模型組肝細(xì)胞脂肪變性以及炎癥細(xì)胞浸潤較輕。
　　3.免疫組化染色結(jié)果（1）NF-κB、COX-2、TNF-α陽性細(xì)胞都主要分布在肝中央靜脈周圍。實(shí)驗(yàn)第1周和第2周，模型組中NF-κB、COX-2、TNF-α的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組；均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01)；干預(yù)組與模型組比較而言表達(dá)有明顯降低；均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<

5、0.05）。模型組第2周較第1周表達(dá)增高；均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（2）肝組織中COX-2的表達(dá)與NF-κB表達(dá)呈正相關(guān)（Spearman等級(jí)相關(guān)r=0.435，P<0.05）。（3）肝組織中NF-κB的表達(dá)與TNF-α表達(dá)呈正相關(guān)（Spearman等級(jí)相關(guān)r=0.336，P<0.05）。（4）肝組織中COX-2的表達(dá)與TNF-α表達(dá)呈正相關(guān)（Spearman等級(jí)相關(guān)r=0.702，P<0.01）。
　　結(jié)論:1、PDTC