TTF1誘導肝癌HepG-2細胞凋亡機制的實驗研究.pdf

1、目的:觀察TTF1影響肝癌HepG-2細胞增殖的情況及其對肝癌HepG-2細胞凋亡的影響，并進一步探討其可能的凋亡作用機制。
　　方法:采用MTT比色法觀察TTF1影響肝癌HepG-2細胞增殖的情況，通過流式細胞儀檢測TTF1對HepG-2細胞周期分布的影響，運用免疫細胞化學方法檢測凋亡相關基因bc1-2、bax及p53蛋白表達，并用Western blot技術檢測Bc1-2、Bax、P53蛋白與Caspase-3、Caspase

2、-8及Caspase-9蛋白表達的情況。
　　結果:TTF1可以抑制肝癌HepG-2細胞的增殖，隨著時間的延長和藥物濃度的增加，其抑制作用越明顯，可見TTF1對肝癌HepG-2細胞的抑制作用具有時間和濃度依賴性，當藥物濃度為10μmol/L作用時間為48 h時，對HepG-2細胞的抑制率為47.1％，接近半數(shù)抑制濃度（IC50）；TTF1可改變細胞周期分布，10μmol/L TTF1分別作用于HepG-2細胞24 h、48 h、7

3、2 h后，G0/G1期比率分別為52.0%、59.6%、64.5%，與對照組比較，有顯著性差異，表明多數(shù)細胞阻滯在 G0/G1期；10μmol/L TTF1分別作用于HepG-2細胞24 h、48 h、72 h后，流式細胞儀檢測DNA含量，可見明顯的細胞凋亡峰，凋亡率分別為6.3%、7.7%、23.8%，與對照組細胞的凋亡率比較有顯著性差異；用藥后與用藥前相比，凋亡相關基因bc1-2、bax及p53蛋白表達均有顯著性改變；其中Bc1-2

4、、P53蛋白表達顯著下降，Bax蛋白表達顯著升高；Caspase-3及Caspase-9隨著時間的延長和藥物劑量的增加，酶原蛋白條帶逐漸變粗，裂解產(chǎn)物逐漸增多，表達逐漸升高，而 Caspase-8在時間不同時，隨時間變化酶原蛋白條帶變粗，裂解產(chǎn)物多，表達升高，在劑量不同時其變化不明顯。
　　結論:TTF1可以抑制肝癌HepG-2細胞的增殖，且具有時-效、量-效關系，同時可以改變細胞周期分布，并可引起肝癌 HepG-2細胞的凋亡，其