131I核素標記B7-H3單抗靶向治療腎透明細胞癌實驗研究.pdf

1、腎癌(renal cell carcinoma，RCC)是泌尿系統(tǒng)常見腫瘤，其最常見的病理類型為腎透明細胞癌(clear cell renal cell carcinoma，ccRCC)，其所占腎癌比例超過80％。腎根治性切除手術是早期腎癌的主要治療方式，而腎癌術后及轉移性腎癌缺乏有效的治療手段。針對腫瘤新生血管的靶向治療被認為是最有可能成為晚期腎癌的有效治療手段，并且針對腫瘤血管開展靶向治療已成為腫瘤生物治療的熱點，其藥物從作用機制上

2、主要分為兩類:抗血管內皮生長因子(VEGF)/血管內皮生長因子受體(VEGFR)和抑制哺乳動物類雷帕霉素靶蛋白(mTOR)途徑。目前靶向治療的臨床治療效果并不顯著，加上其獨特的不良反應，限制了其在臨床的進一步應用。B7-H3在腫瘤的進展尤其是在腫瘤新生血管生成方面是近年來研究的熱點，B7-H3可作為腫瘤相關性抗原發(fā)揮重要作用，是腫瘤靶向治療的一個潛在靶點。
　　本研究首先從臨床收集腎透明細胞癌病例，檢測B7-H3在腎癌中的表達，結

3、合臨床資料，觀察B7-H3在腎癌的價值及臨床意義。然后我們采用核素131I進行B7-H3鼠抗人單克隆抗體4H7標記，131I-4H7的標記率，放化純達到實驗要求，且在腎癌荷瘤鼠移植瘤內具有較高的攝取率和較長的滯留時間，具有良好的靶向性，進而利用131I-4H7對荷腎癌移植瘤裸鼠進行治療，觀察131I-4H7對腎癌的治療效果，并初步探討其可能存在的機制及應用價值。
　　本研究分三個部分:
　　第一部分：B7-H3在腎透明細胞癌

4、中的表達及臨床意義
　　目的:探討B(tài)7-H3在腎透明細胞癌患者血清水平及其臨床意義，及B7-H3在腎透明細胞癌組織中表達的臨床意義。
　　方法:收集臨床上確診為腎透明細胞癌病例資料126例，對其臨床資料進行分析，并留取患者術前血清，及術后腎腫瘤組織標本。運用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)法檢測腎透明細胞癌患者及健康體檢者對照組血清可溶性B7-H3，結合患者臨床資

5、料評估其對腎透明細胞癌患者的臨床意義。運用免疫組織化學方法（immunohistochemistry，IHC）檢測腎透明細胞癌組織中B7-H3的表達，尤其是在血管上皮的表達，結合患者臨床資料，觀察B7-H3表達陽性的臨床意義。
　　結果:腎透明細胞癌患者血清中存在可溶性B7-H3，與健康體檢者相比，其水平顯著增高。腎透明細胞癌患者游離B7-H3高水平與腎癌臨床分期、淋巴結有無轉移及遠處臟器有無轉移有關。B7-H3在腎透明細胞癌組織

6、中陽性表達高于在正常腎臟組織中的表達。126例腎透明細胞癌標本中，有102例(80.95％)腎透明細胞癌患者腫瘤組織血管中可見B7-H3陽性表達。
　　結論:腎透明細胞患者血清可溶性B7-H3水平顯著上調，與疾病進展相關。腎透明細胞癌組織中高表達B7-H3，尤其是在腫瘤血管中呈陽性表達，提示B7-H3可能在腫瘤血管生成方面發(fā)揮重要作用。
　　第二部分：B7-H3單克隆抗體4H7的131I標記及體內生物分布研究
　　目的

7、:研究鼠抗人B7-H3單克隆抗體4H7的131I標記方法，觀察標記抗體藥代動力學特點及其在腎透明細胞癌皮下移植瘤模型中生物學分布與顯像研究。
　　方法:采用氯胺T法進行標記，測定131I-4H7標記率、放化純和穩(wěn)定性。對131I-4H7體內分布及藥物代謝動力學進行研究。觀察131I-4H7在荷腎透明細胞癌（786-0細胞）裸鼠皮下移植瘤模型中的生物學分布，并進行顯像研究。
　　結果:131I-4H7標記率為61.64％，放化

8、純?yōu)?8.4％。131I-4H7在ICR小鼠體內代謝過程符合一級血藥動力學二室模型，t1/2α為27.94min，t1/2β為1634.74min，在體內主要通過肝和腎代謝。131I-4H7在荷瘤小鼠實驗研究中顯示131I-4H7在腫瘤組織中停留時間較長，且皮下移植瘤攝取率較高，在24h達最高，為3.32％ID/g。荷瘤鼠體內γ顯像研究顯示，131I-4H7組在各個時間點放射濃聚高于Na131I組。
　　結論:131I-4H7易于

9、制備，放化純度高，標記物的穩(wěn)定性好，達到實驗要求。131I-4H7在腎癌荷瘤鼠中具有較高的攝取率和較長的滯留時間，具有良好的靶向性，對腎癌放免顯像和治療有潛在的應用前景。
　　第三部分：131I標記B7-H3單克隆抗體在腎透明細胞癌裸鼠移植瘤治療實驗研究
　　目的:觀察131I-4H7在腎透明細胞癌裸鼠移植瘤中的治療作用，并探討其可能存在的機制及應用價值。
　　方法:在荷腎透明細胞癌786-0細胞裸鼠移植瘤直徑達8mm

10、時，將裸鼠模型分為131I-4H7組、131I-mIgG組、131I組及生理鹽水組，各組分別注射250μCi/100μl的131I-4H7、131I-mIgG、Na131I或等體積生理鹽水，通過腫瘤的生長曲線進行傳統(tǒng)藥效學分析，及在第0、7、14、21天分別注射18氟-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽(18F-RGD)，行小動物正電子發(fā)射計算機斷層顯像(positron emissiontomography-computed tom

11、ography，PET-CT)實時監(jiān)測腫瘤體積變化及觀察移植瘤內組織放射性攝取率變化。
　　結果:131I-4H7組腫瘤生長明顯緩慢，治療21天后，腫瘤體積明顯小于131I及生理鹽水注射組，抑瘤率達48.81％，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)。131I-mIgG組在21天時的抑瘤率為22.41％，131I-4H7抑瘤效果優(yōu)于131I-mIgG組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。小動物PET-CT檢查提示，在第7天、14天