RhoB在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)和臨床意義及對(duì)腎癌細(xì)胞增殖、周期和凋亡的影響.pdf

1、目的:Rho家族(RhoA、RhoB、RhoC)屬于小G蛋白家族,是一組相對(duì)分子量約20-25kD的GTP結(jié)合蛋白,在細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中發(fā)揮重要作用,并影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。RhoB是Rho亞家族中一個(gè)較為獨(dú)特的分子,雖然與同家族的RhoA、RhoC具有高度的同源性,但在不同組織和細(xì)胞中其表達(dá)定位和功能等方面存在明顯不同,目前研究顯示RhoB在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮抑癌基因作用。腎癌是我國(guó)泌尿系統(tǒng)最常見(jiàn)的腫瘤之一,占全身惡性腫瘤的2％-

2、3%,主要起源于腎小管上皮細(xì)胞,其中60%-80%為腎透明細(xì)胞癌(ccRCC)。對(duì)于局限性腎透明細(xì)胞癌,手術(shù)切除是主要的治療方法,對(duì)傳統(tǒng)的放化療不敏感,于是我們希望通過(guò)研究RhoB在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及對(duì)腎透明細(xì)胞癌的生物學(xué)功能研究,探索新的腫瘤治療途徑。
　　方法:(1)通過(guò)蛋白免疫印跡(westernblot)方法檢測(cè)16例腎透明細(xì)胞癌及其對(duì)應(yīng)的癌旁組織和3株腎癌細(xì)胞株(786-O,769-P,Caki-1)及其正常腎小管上

3、皮細(xì)胞株(HKC)中RhoB的蛋白表達(dá)水平,并進(jìn)一步通過(guò)免疫組化SP法檢測(cè)80例腎透明細(xì)胞癌石蠟標(biāo)本及10對(duì)腎透明細(xì)胞癌和對(duì)應(yīng)癌旁正常組織石蠟標(biāo)本中RhoB的表達(dá),并結(jié)合病人臨床病理特征進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。(2)構(gòu)建pcDNA3.0-Flag-RhoB真核表達(dá)載體,并通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將其轉(zhuǎn)入腎癌細(xì)胞786-O和Caki-1中,用MTS法、細(xì)胞平板克隆試驗(yàn)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)過(guò)表達(dá)RhoB對(duì)腎癌細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡效應(yīng)的影響。
　　

4、結(jié)果:(1)RhoB在ccRCC組織和腎癌細(xì)胞株中表達(dá)水平明顯低于相應(yīng)的癌旁組織及正常腎小管上皮細(xì)胞株(HKC)(P值均<0.001),免疫組化結(jié)果顯示RhoB的低表達(dá)水平與患者的腫瘤大小(P<0.001)、TNM分級(jí)(P=0.006)存在顯著相關(guān)性,與患者年齡、性別無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。(2)過(guò)表達(dá)RhoB顯著抑制腎癌細(xì)胞786-O和Caki-1的細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞周期G2/M阻滯,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)論:RhoB在腎透明