Crb3影響小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞分泌睪酮的研究.pdf

1、目的:檢測TM3(小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞)中是否有Crb3基因的表達(dá),如有表達(dá),則通過轉(zhuǎn)染,使其Crb3表達(dá)上調(diào),檢測基因表達(dá)調(diào)控后睪酮分泌功能的變化。探索Crb3對睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮分泌功能影響的相關(guān)性。為臨床中睪酮缺乏綜合征的治療提供向?qū)А?br>　　方法:
　　1、通過培養(yǎng)傳代細(xì)胞,從中提取RNA。將RNA反轉(zhuǎn)錄成C-DNA,利用普通PCR檢測Crb3在睪丸間質(zhì)細(xì)胞中的基因表達(dá)。
　　2、利用Western-Blot檢測Crb

2、3在睪丸間質(zhì)細(xì)胞中蛋白翻譯表達(dá)情況,證明Crb3在TM3中翻譯蛋白。
　　3、轉(zhuǎn)染細(xì)胞,使Crb3在TM3細(xì)胞中過表達(dá),設(shè)置轉(zhuǎn)染組、空轉(zhuǎn)組、非轉(zhuǎn)染組,利用熒光定量PCR檢測Crb3基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)改變。
　　4、同時(shí)以化學(xué)發(fā)光法檢測轉(zhuǎn)染組、空轉(zhuǎn)組、非轉(zhuǎn)染組培養(yǎng)基中睪酮的值。
　　5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:利用spss19軟件系統(tǒng)建立數(shù)據(jù)庫和進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,多樣板均數(shù)間比較采用方差分析,P<0.05認(rèn)為差異用統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)

3、果:
　　1、睪丸間質(zhì)細(xì)胞中Crb3的DNA的表達(dá)及其意義
　　普通PCR結(jié)果顯示:Crb3在睪丸間質(zhì)細(xì)胞中呈現(xiàn)出低表達(dá)。
　　2、睪丸間質(zhì)細(xì)胞中Crb3的蛋白質(zhì)的翻譯及其臨床意義
　　Western-blot結(jié)果顯示:Crb3在睪丸間質(zhì)細(xì)胞中,Crb3蛋白質(zhì)翻譯亦呈現(xiàn)出低表達(dá),正好符合Crb3DNA的表達(dá)情況。
　　3、轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:Crb3過表達(dá)轉(zhuǎn)染組與空轉(zhuǎn)組及正常未轉(zhuǎn)染組相比,轉(zhuǎn)染組CT小于其他兩