PTHrP通過(guò)初始纖毛調(diào)控軟骨肉瘤細(xì)胞增殖和侵襲能力的機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察PTH/PTHrP蛋白對(duì)人軟骨肉瘤細(xì)胞系SW1353增殖和侵襲能力的影響，來(lái)探究PTH/PTHrP蛋白如何通過(guò)調(diào)控細(xì)胞初始纖毛表達(dá)來(lái)影響腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲能力的作用機(jī)制。
　　方法：通過(guò)收集臨床手術(shù)切除的人軟骨肉瘤標(biāo)本，用免疫組化法檢測(cè)腫瘤組織中PTHrP/Hedgehog信號(hào)通路相關(guān)蛋白及腫瘤增殖能力相關(guān)蛋白 Ki76蛋白表達(dá)水平，應(yīng)用CCK8法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖能力，Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)軟骨肉瘤細(xì)胞侵襲能力，

2、免疫熒光染色法標(biāo)記不同刺激條件下軟骨肉瘤細(xì)胞初始纖毛表達(dá)水平；再通過(guò)SiRNA干擾、Western blot及RT-PCR等實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PTH/PTHrP對(duì)軟骨肉瘤細(xì)胞增殖、侵襲能力及初始纖毛相關(guān)蛋白及基因表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：免疫組化結(jié)果顯示人軟骨肉瘤組織中存在PTHrP/Hedgehog信號(hào)通路相關(guān)蛋白明顯表達(dá)，并且與腫瘤細(xì)胞增殖能力呈正相關(guān)；適當(dāng)濃度的PTH細(xì)胞因子能夠促進(jìn)軟骨肉瘤細(xì)胞的增殖和侵襲能力，并且能夠明顯抑制軟骨肉瘤

3、細(xì)胞表面初始纖毛的表達(dá)；SiRNA下調(diào)軟骨肉瘤細(xì)胞PTHrP蛋白表達(dá)后細(xì)胞初始纖毛表達(dá)水平增高；水合氯醛破壞初始纖毛后，PTH對(duì)軟骨肉瘤細(xì)胞增殖和侵襲能力的促進(jìn)作用減弱；初始纖毛結(jié)構(gòu)的破壞能下調(diào) PTHrP/Hedgehog信號(hào)通路相關(guān)基因及蛋白表達(dá)，且不受PTH作用影響。
　　結(jié)論：PTH/PTHrP對(duì)軟骨肉瘤增殖和侵襲能力起正向調(diào)控作用，其作用機(jī)制可能通過(guò)作用并調(diào)控PTHrP/Hedgehog信號(hào)通路相關(guān)的初始纖毛的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)