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文檔簡介
1、老年癡呆,也叫阿爾茲海默癥(Alzheimer'sdisease,AD)是神經(jīng)系統(tǒng)的退行性疾病。目前,AD已成為導致老年人死亡的第四位主要原因,僅次于心臟病、癌癥及中風。因此,老年癡呆成了世界各國予以攻克的矚目問題。Tau蛋白的異常高度磷酸化是出現(xiàn)PHFs/NFTs的主要原因,導致神經(jīng)纖維內(nèi)微管解聚、變形、扭曲、退化,從而引起老年癡呆。
目前Tau基因已成為阿爾茲海默相關(guān)基因的研究熱點,但是tau基因在斑馬魚中的表達未見報
2、道。為研究斑馬魚tau基因的時空表達,確定藥物作用靶點,本文選用整體原位雜交的方法,研究tau基因在斑馬魚胚胎中的時空表達圖譜。采用RT-PCR技術(shù),克隆得到tau基因片段,693bp,連接到PGEMT-easy載體上,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中,運用菌落PCR鑒定陽性克隆。氨基酸序列分析表明,與人、家鼠、爪蟾的同源性分別達到65%,63%,57%。通過體外轉(zhuǎn)錄獲得地高辛標記的RNA探針,對各時期胚胎進行原位雜交,結(jié)果顯示tau基因在斑馬魚的早期
3、均一表達,18體節(jié)之后集中在中后腦表達,三天后的斑馬魚中沒有明顯表達。用紅色熒光蛋白標記islet的RNA探針,用綠色熒光蛋白標記tau的RNA探針,原位雜交,用熒光素分子偶聯(lián)的單克隆抗體與探針分子特異性結(jié)合,熒光顯色劑顯色后在熒光顯微鏡下觀察,準確定位了tau基因的表達位置在中后腦,與islet表達的細胞不同。
初步篩選了影響該基因表達的兩種中藥標準品,雖然效果不明顯,但為后期研究該基因的功能和藥物高通量篩選打下了基礎(chǔ),
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