PPARγ激動劑吡格列酮對心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷保護(hù)及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、再灌注是缺血性心臟病的主要治療方法，而伴隨的缺血再灌注(ischemic/reperfusion，I/R)損傷成為影響療效的一個重要因素。由于缺血預(yù)適應(yīng)(Ischemic preconditioning，IPC)可以減輕心肌損傷[1]，因此IPC也成為了減輕再灌注損傷的重要手段之一。近年來實(shí)驗(yàn)證實(shí)，一些藥物具有減輕心肌I/R損傷的作用，被視為“藥物預(yù)適應(yīng)”(pharmacological preconditioning，PPC)。先前研

2、究表明，各種預(yù)適應(yīng)誘導(dǎo)腺苷、緩激肽等內(nèi)源性物質(zhì)釋放，并通過蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)、細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(external-signalregulated kinase，ERK)及磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide Kinase-3，PI3K)等途徑作用于線粒體敏感性鉀通道(mitochondrial ATP-sensitive K+channels，mitoKATP channels)而

3、發(fā)揮保護(hù)作用。另有研究表明，過氧化物酶體增殖物激活型受體Y(peroxisome proliferator activated receptors，PPARγ)配體可以減輕缺血再灌注損傷，我們先前的研究也表明，人工合成的PPARγ激動劑——噻唑烷二酮類藥物(Thiazolidinediones，TZDs)中的吡格列酮，可以通過開放mitoKATP通道發(fā)揮對抗大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用。本研究擬利用原代培養(yǎng)的新生大鼠心肌細(xì)胞，在既往研究

4、的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討PPARγ激動劑——吡格列酮抗大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　 1.目的:
　　 1.1觀察吡格列酮對缺氧復(fù)氧后新生大鼠心肌細(xì)胞的保護(hù)作用及對蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)表達(dá)的影響。
　　 1.2觀察吡格列酮對缺氧復(fù)氧后的新生大鼠心肌細(xì)胞線粒體膜電位的影響及PKC抑制劑Chelerythrine對其的影響。
　　 2.方法:
　　 2.1

5、利用原代培養(yǎng)的新生SD(Sprague-Dawley)大鼠心肌細(xì)胞，分為溶媒對照組、H-r+溶媒對照組、H-r+2μM濃度吡格列酮組、H-r+2μM濃度吡格列酮+GW9662組，預(yù)處理24小時后建立缺氧復(fù)氧模型。收集心肌細(xì)胞，Hoechst33258染色法檢測心肌細(xì)胞凋亡：免疫印跡方法檢測PKC表達(dá)。
　　 2.2利用原代培養(yǎng)的新生SD(Sprague-Dawley)大鼠心肌細(xì)胞，分為溶媒對照組、H-r+溶媒對照組、H-r+0.

6、1μM濃度吡格列酮組、H-r+1μM濃度吡格列酮組、H-r+2μM濃度吡格列酮組、H-r+2μM濃度吡格列酮+ GW9662組、H-r+2μM濃度吡格列酮+Chelerythrine組，預(yù)處理24小時后建立缺氧復(fù)氧模型，模型建立后予線粒體膜電位檢測試劑JC-1處理，然后利用激光共聚焦顯微鏡檢測線粒體膜電位(△ψm)。
　　 3.結(jié)果:
　　 3.1缺氧復(fù)氧后心肌細(xì)胞早期凋亡率升高(由溶媒對照組的0.20％±0.03％增加

7、至12.22±1.45％，p<0.05)；吡格列酮減少心肌細(xì)胞凋亡(8.32±0.89％)，而吡格列酮抗心肌細(xì)胞凋亡的作用又可以被GW9662阻斷(12.46±1.62％，p<0.05)；
　　 3.2與單純?nèi)毖鯊?fù)氧組相比，吡格列酮不增加PKC(1.033±0.026，p>0.05)表達(dá)：
　　 3.3與H-r+溶媒組相比，H-r+吡格列酮組可以抑制線粒體膜電位下降(p<0.05)，這種作用呈濃度依賴性，Cheleryt