海帶多糖LO1對(duì)內(nèi)毒素致內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：利用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)體外培養(yǎng)模型，探討海帶海帶多糖L01對(duì)內(nèi)毒素刺激下，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)和分泌iNOS、eNOS、PGI2的影響，以及對(duì)內(nèi)皮的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響，為研究和開(kāi)發(fā)新型抗血栓藥物提供理論和實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。 方法：(1)體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)，隨機(jī)分成7組，空白對(duì)照組(10％FCS)，L-L01對(duì)照組(10mg/L L01)、LMWH對(duì)照組(50U/mlLMWH)、模型組(40mg/L

2、 LPS)、L-L01低劑量組(40mg/L LPS+10mg/LL01)、H-L01高劑量組(40mg/L LPS+100mg/L L01)、LMWH組(40mg/LLPS+50U/ml LMWH)，培養(yǎng)48h，酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)法測(cè)定HUVEC培養(yǎng)上清夜中的iNOS、eNOS、6-Keto-PGF1α水平。(2)逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)各組HUVEC內(nèi)iNOSmRNA、eNOSmRNA、PGISmRNA的表

3、達(dá)，其擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后進(jìn)行密度掃描及半定量分析。(3)電鏡下觀察各組細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果：40mg/L的內(nèi)毒素培養(yǎng)48h，可致HUVEC培養(yǎng)液中iNOS水平顯著升高，eNOS、6-K-PGF1α水平顯著降低(P<0.01，P<0.05)；HUVEC中eNOSmRNA、PGISmRNA表達(dá)水平顯著下降，iNOSmRNA表達(dá)水平顯著升高；HUVEC細(xì)胞核不規(guī)則，細(xì)胞間微絨毛減少、消失，線粒體(Mi)腫脹，嵴溶解消失，核旁溶酶體增多。

4、而LMWH及不同濃度的L01可拮抗內(nèi)毒素所致的各種變化。 結(jié)論：海帶多糖L01可拮抗LPS對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的作用，增多eNOS、6-K-PGF1α 的分泌，降低iNOS的分泌；上調(diào)eNOSmRNA、PGISmRNA的表達(dá)，下調(diào)iNOSmRNA的表達(dá)，從而升高eNOS/β-actine、PGIS/β-actine的比值，降低iNOS/β-actine的比值；從超微結(jié)構(gòu)上改善LPS對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的損傷。因此海帶多糖L01可以從功能和形