低劑量131I內(nèi)照射誘導(dǎo)小鼠胸腺細(xì)胞DNA損傷適應(yīng)性反應(yīng)的蛋白組學(xué)分析.pdf

1、[目的]：
　　應(yīng)用雙向電泳及生物質(zhì)譜等蛋白質(zhì)組學(xué)的方法探討低劑量131I內(nèi)照射誘導(dǎo)小鼠胸腺細(xì)胞發(fā)生適應(yīng)性反應(yīng)時(shí)的蛋白質(zhì)表達(dá)，從而揭示低劑量131I內(nèi)照射誘導(dǎo)小鼠胸腺細(xì)胞發(fā)生適應(yīng)性反應(yīng)的機(jī)制。
　　[方法]：
　　80只雄性昆明小鼠被隨機(jī)分成四組，分別是對(duì)照組(D0)、低劑量組(D1)、高劑量組(D2)、組合劑量組(D1+D2)，每組20只。D0組腹腔注射0.5ml生理鹽水，D1、D2組腹腔注射放射性比活度分別是1Bq

2、/g、105 Bq/g的碘[131I]化鈉溶液0.5ml，D1+D2組預(yù)先腹腔注射0.5ml的放射性比活度為1Bq/g的碘[131I]化鈉溶液，12h后再腹腔注射0.5ml的放射性比活度為105 Bq/g的碘[131I]化鈉溶液。通過(guò)彗星實(shí)驗(yàn)和DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)131I引起的胸腺細(xì)胞DNA損傷程度，建立低劑量131I內(nèi)照射誘導(dǎo)小鼠胸腺細(xì)胞適應(yīng)性反應(yīng)模型;利用雙向電泳技術(shù)（Two-dimensional electrophoresi

3、s，2-DE）獲得以上四組小鼠胸腺細(xì)胞蛋白質(zhì)的二維凝膠電泳圖譜，用差異蛋白分析軟件對(duì)二維凝膠電泳圖譜進(jìn)行分析，找出四組之間的差異蛋白;利用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(Matrix assistedlaser desorption/ionization time of flight mass spectrometr, MALDI-TOF-MS)對(duì)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定分析;并利用基因本體論(Gene ontology，Go)對(duì)鑒

4、定出的蛋白質(zhì)進(jìn)行聚類(lèi)分析。最后用蛋白免疫印跡(Western blotting，WB)的方法檢測(cè)經(jīng)質(zhì)譜鑒定出的差異蛋白的表達(dá)量。
　　[結(jié)果]：
　　1.低劑量131I內(nèi)照射誘導(dǎo)小鼠胸腺細(xì)胞DNA損傷的適應(yīng)性反應(yīng)
　　(1) D0、 D1、D2組小鼠胸腺細(xì)胞彗星尾長(zhǎng)隨著131I輻射劑量的增加而增加，D2組小鼠胸腺細(xì)胞彗星尾長(zhǎng)大于D1+D2組（P＜0.05）。
　　(2)給予小鼠腹腔注入不同劑量的131I，D0、

5、D1、D2組小鼠胸腺細(xì)胞“梯狀條帶”亮度隨著輻射劑量的增加而增加，D2組小鼠胸腺細(xì)胞“梯狀條帶”亮度大于D1+D2組（P＜0.05）。
　　2.低劑量131I內(nèi)照射誘導(dǎo)小鼠胸腺細(xì)胞DNA損傷適應(yīng)性反應(yīng)的蛋白組學(xué)分析
　　(1)用Image Master2D軟件在分析膠成像的基礎(chǔ)上比較四組蛋白表達(dá)譜的差別。D1組與D0組比較，D1組下調(diào)的蛋白點(diǎn)數(shù)目是76個(gè)，上調(diào)的蛋白點(diǎn)數(shù)目是205個(gè)(P＜0.05); D2組與D0組比較，D2

6、組下調(diào)的蛋白點(diǎn)數(shù)目是81個(gè)，上調(diào)的蛋白點(diǎn)數(shù)目是184個(gè)(P＜0.05);D1+D2組與D2組比較，D1+D2組上調(diào)的蛋白數(shù)是90個(gè)，下調(diào)的蛋白數(shù)是41個(gè)(P＜0.05)。
　　(2)選擇19個(gè)蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，這19個(gè)蛋白質(zhì)分別是SCFD1、OLST、HNRPK、DLST、FAF1、MPI、NACA、SRSF1、KRT17、KRT18、CDK、CK2b、RPL11、SUB1、BID、DBLOH、PSMB9、ARHGDIB、MYL

7、4。
　　(3)這些蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)Go分析后對(duì)其生物過(guò)程、分子功能和細(xì)胞成分分別做分類(lèi)餅圖，并對(duì)生物過(guò)程的一部分繪制表格。結(jié)果表明，在生物過(guò)程中涉及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白的比率是6.17％，涉及細(xì)胞死亡的蛋白質(zhì)的比率是3.16％，參與蛋白質(zhì)翻譯的百分率是2.6％。
　　(4)WB的結(jié)果顯示蛋白BID的表達(dá)量與該蛋白在四組雙向電泳圖譜上的表達(dá)量基本一致，即是在D1+D2組中BID的表達(dá)量高于D2組(P＜0.05)。WB的結(jié)果顯示D1+D2組