日本血吸蟲UV致弱尾蚴誘導(dǎo)不同品系小鼠的免疫保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)理的初步研究.pdf

1、日本血吸蟲病仍然是嚴(yán)重危害我國(guó)人民身體健康的寄生蟲病。2003年全國(guó)調(diào)查資料顯示，我國(guó)共有現(xiàn)癥患者80余萬(wàn)，受威脅人口達(dá)1億。目前，血吸蟲病的防治工作強(qiáng)調(diào)以化療為主，結(jié)合釘螺控制、健康教育等手段來(lái)降低血吸蟲病的危害。雖然，化療起到了很好的治療作用，但仍存在一些問(wèn)題，如：化療不能控制再感染，無(wú)法徹底阻斷疾病的傳播，長(zhǎng)期使用吡喹酮可能導(dǎo)致抗藥性的產(chǎn)生等。鑒于疫苗的研究和使用在世界范圍內(nèi)為人類預(yù)防和消滅許多傳染性疾病起到了非常重要的作用，因此

2、，研究血吸蟲病疫苗，通過(guò)“短效”的化療作用及疫苗接種后產(chǎn)生的“長(zhǎng)效”免疫預(yù)防作用相結(jié)合來(lái)控制血吸蟲病，成為上個(gè)世紀(jì)80年代以來(lái)全世界科學(xué)家的共識(shí)。 血吸蟲病疫苗的研究歷時(shí)70余年，大體上經(jīng)歷了死疫苗、減毒活疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗研究階段。迄今為止，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，以輻照致弱尾蚴或童蟲為免疫原的預(yù)防效果最佳。當(dāng)然，應(yīng)用輻照致弱尾蚴直接作為疫苗，存在著抗原材料有限、具有潛在感染的危險(xiǎn)及可能引發(fā)有限病變的倫理問(wèn)題等。但是，利用致弱

3、尾蚴免疫模型揭示疫苗誘導(dǎo)保護(hù)力的機(jī)制，無(wú)疑將為最終獲得行之有效的疫苗提供重要的理論基礎(chǔ)。目前，關(guān)于輻照致弱尾蚴生物學(xué)的研究比較有限，包括其活力、外部形態(tài)、內(nèi)部顯微結(jié)構(gòu)及抗原成分等，其誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生免疫保護(hù)力的分子機(jī)制可能與致弱尾蚴進(jìn)入宿主后的抗原遞呈不同于正常尾蚴有關(guān)，包括輻照所致的尾蚴移行延遲、抗原成分改變(隱蔽抗原的暴露)及失去了正常尾蚴中下調(diào)免疫應(yīng)答的特定蛋白等有關(guān)。因此，觀察輻照致弱尾蚴的生物學(xué)改變，是研究其誘導(dǎo)相關(guān)的免疫保護(hù)機(jī)理

4、的買驗(yàn)基礎(chǔ)。值得注意的是，國(guó)內(nèi)外對(duì)輻照致弱尾蚴的相關(guān)免疫學(xué)研究多集中在曼氏血吸蟲，其在許多品系小鼠中可誘導(dǎo)60％～80％的保護(hù)力，γ射線致弱尾蚴免疫非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物后可誘導(dǎo)產(chǎn)生大于50％的保護(hù)力。與曼氏血吸蟲相比，對(duì)日本血吸蟲輻照致弱尾蚴的研究起步較晚，多在借鑒曼氏血吸蟲相關(guān)研究經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上開展。而現(xiàn)有資料表明，日本血吸蟲輻照致弱尾蚴在小動(dòng)物(特別是小鼠)中誘導(dǎo)產(chǎn)生的保護(hù)力水平常不穩(wěn)定，目前尚缺乏公認(rèn)的能對(duì)其產(chǎn)生穩(wěn)定高保護(hù)力的小鼠模型。本

5、實(shí)驗(yàn)室曾在昆明鼠、DBA及C57BL/6小鼠品系進(jìn)行小規(guī)模的UV(ultra-Violet，紫外線)致弱尾蚴保護(hù)力實(shí)驗(yàn)，希望構(gòu)建日本血吸蟲致弱尾蚴誘導(dǎo)保護(hù)力的小鼠模型，雖然抗體檢測(cè)提示致弱尾蚴免疫誘導(dǎo)了高于正常尾蚴感染的特異性體液免疫應(yīng)答，但是均未獲得預(yù)期的保護(hù)力效果。本課題進(jìn)一步深入地在多品系的小鼠進(jìn)行了免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)，并觀察比較了各實(shí)驗(yàn)組DBA小鼠的Th1/Th2細(xì)胞免疫應(yīng)答特征，力圖探討小鼠的品系、免疫應(yīng)答模式與對(duì)日本血吸蟲感染的保

6、護(hù)力之間的關(guān)系。 本文觀察了UV致弱尾蚴和正常尾蚴活力，并利用掃描電鏡、透射電鏡及免疫電鏡系統(tǒng)地觀察日本血吸蟲UV致弱尾蚴在外部形態(tài)、內(nèi)部顯微結(jié)構(gòu)、抗原成分及其定位與正常尾蚴的異同。選取昆明鼠作為觀察對(duì)象，觀察了不同UV照射劑量、紫外光源等因素對(duì)免疫保護(hù)力的影響。在此基礎(chǔ)上，又比較了不同鼠系(昆明鼠、DBA、BALB/c)經(jīng)免疫后誘導(dǎo)的保護(hù)力。同時(shí)，對(duì)DBA小鼠的細(xì)胞免疫應(yīng)答進(jìn)行了動(dòng)態(tài)觀察。旨在繼續(xù)探索可用于日本血吸蟲UV致弱尾

7、蚴免疫保護(hù)機(jī)制研究的小鼠模型，并探討與日本血吸蟲UV致弱尾蚴保護(hù)力有關(guān)的免疫應(yīng)答機(jī)制。本研究結(jié)果進(jìn)一步豐富了日本血吸蟲UV致弱尾蚴保護(hù)性免疫機(jī)制的研究，為構(gòu)建適宜的UV致弱尾蚴免疫保護(hù)力的動(dòng)物模型提供了重要的基礎(chǔ)資料。 1.尾蚴活力觀察：經(jīng)200、445(UV照射40秒)和800μ w/cm<'2>的UV照射1min，尾蚴的死亡率分別為：1.78％、1.73％和2.09％。經(jīng)三種UV強(qiáng)度照射的尾蚴與未經(jīng)照射的尾蚴的活力間無(wú)顯著性

8、差異(P>0.05)。 2.尾蚴體表及內(nèi)部結(jié)構(gòu)的電鏡觀察：UV致弱尾蚴與正常尾蚴相比，①其體部高度收縮，具有明顯皺褶，尾部分叉明顯腫脹，體部向內(nèi)凹陷，且體棘缺損，邊緣粗糙；②肌纖維層變薄，有少許斷裂，線粒體未見明顯的嵴狀結(jié)構(gòu)；③UV致弱尾蚴切片上的膠體金顆粒少于正常尾蚴切片，特別是肌纖維處，且UV致弱尾蚴切片上的膠體金顆粒在多部位有聚集分布現(xiàn)象。由此可能提示，UV照射損傷了尾蚴的體表、肌肉、重要代謝器官的結(jié)構(gòu)，尾蚴抗原成分也能發(fā)

9、生了變化。 3.昆明鼠、DBA及。BALB/c小鼠為對(duì)日本血吸蟲UV致弱尾蚴低應(yīng)答的小鼠品系。昆明鼠經(jīng)不同UV強(qiáng)度、不同紫外源照射的日本血吸蟲尾蚴免疫后的保護(hù)力為-1.0～23.75％；昆明鼠、DBA、BALB/c小鼠經(jīng)100條/鼠的免疫劑量、免疫與攻擊間隔4周，致弱尾蚴所誘導(dǎo)的保護(hù)力均較低(8.13％～26.9％)。與本實(shí)驗(yàn)室前期保護(hù)力實(shí)驗(yàn)的結(jié)果一致，提示昆明鼠、DBA、BALB/c小鼠不適宜作為日本血吸蟲UV致弱尾蚴免疫保護(hù)

10、力研究的動(dòng)物模型。 4.觀察DBA鼠在日本血吸蟲UV致弱尾蚴免疫組、正常尾蚴感染組及先免疫后攻擊組之間血清中IL-4、IL-10、IFN-γ及IL-12p40的水平變化。結(jié)果顯示，致弱尾蚴免疫組小鼠血清中IL-12p40在免疫后第3周降到最低水平，但是總體上細(xì)胞因子在0～4周并未產(chǎn)生明顯變化；與感染組和先免疫后攻擊組相比，細(xì)胞因子總體水平較低，盡管IL-10及IFN-γ在3組之間的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)并無(wú)顯著差異(P>0.05)，且免疫組