鼻咽癌外周血EBV特異性CTL分析.pdf

1、目的：評(píng)估EBV相關(guān)性鼻咽癌中特異性CTL的免疫應(yīng)答,探討其在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中的作用,為鼻咽癌的細(xì)胞免疫治療及腫瘤多肽疫苗開(kāi)發(fā)提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù). 方法：收集31例初診鼻咽癌患者及17例EBV健康攜帶者(對(duì)照)外周血,所有鼻咽癌患者均經(jīng)病理確診,采用密度梯度法分離所有PBMCs,采用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng).序列特異性引物(PCR.SSP)技術(shù)對(duì)所有標(biāo)本進(jìn)行組織配型,根據(jù)組織配型結(jié)果,應(yīng)用A*02-CLG、A*02-GLG、A*02-F

2、LY、A*02-LLW四個(gè)的四聚體分別檢測(cè)11例HLA-A*02陽(yáng)性的鼻咽癌患者和7例HLA-A*02陽(yáng)性EBV健康攜帶者PBMCs中EBV抗原表位特異性CTL頻數(shù).同時(shí)應(yīng)用ELISPOT方法檢測(cè)PBMCs針對(duì)FLY、LLW兩條肽段產(chǎn)生IFN-γ的抗原表位特異性CTL頻數(shù).另外,應(yīng)用熒光定量PCR和ELISA方法分別檢測(cè)27例鼻咽癌患者和17例健康對(duì)照血清中的EBV-DNA拷貝數(shù)和EA-IgA、VCA-IgA滴度.統(tǒng)計(jì)采用SPSS12.

3、0分析軟件進(jìn)行分析,具體采用卡方檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)及Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)進(jìn)行分析,當(dāng)P<0.05,認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. 結(jié)果：1.鼻咽癌組中,A*02-CLG、A*02-GLG、A*02-FLY、A*02-LLW四個(gè)四聚體所檢測(cè)的抗原表位特異性CTL頻數(shù)(﹪)均數(shù)分別為0.11±0.15﹪,0.12±0.17﹪,0.08±0.08﹪,0.07±0.06﹪;同時(shí),健康對(duì)照組中相應(yīng)的均數(shù)分別為0.26±0.17﹪,0.23±0.16﹪

4、,0.34±0.27﹪,0.22±0.11﹪.經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,FLY、LLW表位特異性CTL在鼻咽癌組和健康對(duì)照組之間有顯著差異(P<0.05). 2.鼻咽癌組中A*02-FLY tetramer檢測(cè)結(jié)果與其血清中EBV-DNA拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值成負(fù)相關(guān)(r=-0.893,P<0.05),而A*02-CLG、A*02-GLG、A*02-LLW三個(gè)四聚體檢測(cè)結(jié)果與其血清中EBV-DNA拷貝數(shù)對(duì)數(shù)值無(wú)相關(guān)性. 3.鼻咽癌組ELIS

5、POT法檢測(cè)針對(duì)FLY、LLW兩條肽段檢測(cè)產(chǎn)生IFN-γ的CTL頻數(shù)均數(shù)分別為3.0±3.0、3.8±2.2(SFC/10<'6>PBMCs),健康對(duì)照組相應(yīng)的頻數(shù)均數(shù)分別為14.3±7.0、9.5±2.5(SFC/10<'6>PBMCs),兩組之間存在顯著差異(P<0.05). 4.ELISPOT法檢測(cè)針對(duì)FLY、LLW兩條肽段檢測(cè)產(chǎn)生IFN-γ的CTL頻數(shù)結(jié)果與四聚體法檢測(cè)結(jié)果之問(wèn)都具有相關(guān)性(FLY:r=0.901,P<0

6、.01;LLW::r=0.889.P<0.01). 5.取血清中EBV.DNA拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值,對(duì)數(shù)值均數(shù)在鼻咽癌組和健康對(duì)照組中分別為3.30±0.22、4.52±0.88,兩組之間無(wú)顯著差異(P=0.065). 6.鼻咽癌患者血清中EA.IgA、VCA-IgA、EBV-DNA檢出率分別為63﹪、85.2﹪、92.6﹪,而健康對(duì)照組中相應(yīng)的檢出率分別0﹪、0﹪、11.8﹪,三個(gè)指標(biāo)的檢出率在兩組之間均存在顯著差異(P<0

7、.001). 結(jié)論： 1.鼻咽癌患者外周血中FLY、LLW表位特異性CTL頻數(shù)低于健康對(duì)照.提示該兩個(gè)抗原表位特異性CTL的缺乏在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中可能起一定的作用. 2.鼻咽癌患者和健康對(duì)照外周血中特異性CTL可與EBV共存,鼻咽癌組中A*02-FLY四聚體檢測(cè)結(jié)果與其血清中EBV-DNA拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值成負(fù)相關(guān),提示該表位特異性CTL可能在清除:EBV中起著優(yōu)勢(shì)作用. 3.四聚體技術(shù)能方便敏感檢測(cè)鼻咽癌