代謝綜合征患者血小板聚集與胰島素抵抗.pdf

1、代謝綜合征(Metabolic syndrome，MS)是一組心血管病危險(xiǎn)因子在人體集聚的狀態(tài)，包括腹型肥胖、血脂紊亂、高血糖及高血壓等，其直接后果是導(dǎo)致嚴(yán)重的心血管病及并發(fā)癥，甚至死亡，是全球面臨的威脅人類健康的一大公共衛(wèi)生問題。根據(jù)最新的國(guó)際糖尿病聯(lián)盟(International Diabetes Federation，IDF)定義，中國(guó)有7700萬MS患者。已有的研究顯示，：MS人群心血管疾病(冠心病和中風(fēng))患病率約增高3倍，心血

2、管疾病死亡風(fēng)險(xiǎn)增高5倍，糖尿病風(fēng)險(xiǎn)增高5倍。高甘油三酯血癥(hypertriglyceridemia，HTG)、高低密度脂蛋白(Low density lipoprotein，LDL-C)血癥、低高密度脂蛋白(High density lipoprotein，HDL-C)血癥、高血壓、高血糖等代謝異?？赏ㄟ^損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞及直接對(duì)血小板的作用，使血小板產(chǎn)生一系列變化，最終導(dǎo)致血小板活化、聚集及釋放反應(yīng)。血小板異?；罨茄懿∽冃纬傻闹匾?/p>

3、機(jī)制。 已有的研究揭示，胰島素抵抗及硝酸鹽抵抗是MS患者的一種表現(xiàn)，且對(duì)MS患者的血小板功能具有重要的影響，是這類患者易發(fā)生血管病變的主要原因之--. 血小板具有獨(dú)立的一氧化氮(nitric oxide，NO)系統(tǒng)。在我們既往的研究中也發(fā)現(xiàn)，血小板源性NO與血小板活化有著直接的聯(lián)系。NO供體如硝酸甘油(glyceryl trinitrate，GTN)、硝普鈉等，可與還原型巰基(sulfhydryl group，-SH)相

4、作用形成NO或S-亞硝基硫醇，NO與細(xì)胞內(nèi)可溶性的鳥苷酸環(huán)化酶(guanylatecyclase，GC)上的亞鐵血紅素輔基相結(jié)合，從而激活GC，使細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷鳥苷(cyclicguanosine monophosphate，cGMP)水平升高，從而抑制細(xì)胞內(nèi)肌漿網(wǎng)Ca<'2+>的釋放和細(xì)胞外Ca<'2+>的內(nèi)流，使胞漿內(nèi)游離Ca<'2+>水平下降，維持血小板的穩(wěn)定。另外，NO本身就可調(diào)節(jié)Ca<'2+>動(dòng)員，發(fā)揮抗血小板效應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)：GT

5、N呈劑量依賴的方式抑制血小板聚集，但GTN半數(shù)抑制濃度(concentration producing 50﹪inhibition，IC50)在胰島素抵抗患者要明顯增高；將胰島素/血糖，與GTN IC50進(jìn)行相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)兩者明顯相關(guān)(r=0.530，P=0.008)，進(jìn)一步表明胰島素抵抗患者對(duì)NO供體敏感性下降。也就是說，硝酸酯類的抗血小板作用在肥胖等胰島素抵抗患者是降低的。生理濃度的胰島素在調(diào)節(jié)血糖的同時(shí)，還可通過：“胰島素→NO→

6、GC→cGMP→Ca<'2+>”途徑，以及減少血管活性物質(zhì)和趨化物質(zhì)的釋放等，從而減少高血壓、動(dòng)脈硬化及血栓病的發(fā)病。胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)時(shí)，胰島素的上述功能減弱，血小板的穩(wěn)定性下降，從而增加心血管病的危險(xiǎn)。這種觀點(diǎn)已經(jīng)被一些實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在胰島素抵抗的個(gè)體，如肥胖患者、肥胖2型糖尿病患者、高血壓患者，胰島素抗血小板作用減弱或喪失。 富血小板血漿(platelet-rich plasma，PRP)與胰島素孵育后，胰島素通過與血小板膜上受體

7、作用，激活細(xì)胞內(nèi)一氧化氮合酶(constitutive nitric oxidesynthase，cNOS)，作用于胞內(nèi)L-精氨酸(L-arginine，L-Arg)，生成NO增多，血小板聚集功能下降或解聚。大量的研究已證實(shí)NO在調(diào)節(jié)血小板活性中起關(guān)鍵作用。正常情況下，胰島素處理后PRP血漿中硝酸鹽水平(NO水平)上升，如果NO水平無變化或升高較少，可能是胰島素抵抗的一種體現(xiàn)。 國(guó)內(nèi)關(guān)于代謝綜合征患者血小板聚集功能改變、血小板胰

8、島素抵抗及硝酸酯類抵抗，以及胰島素抑制血小板聚集的調(diào)節(jié)途徑少見報(bào)道。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 通過觀察正常人及代謝異?；颊哐“逶诓煌瑮l件下的PAG(M)，以及胰島素處理后NO水平的測(cè)定，以證實(shí)MS患者血小板存在胰島素抵抗及硝酸酯類抵抗現(xiàn)象，并對(duì)其可能的機(jī)制進(jìn)行初步探討。 研究對(duì)象與方法: 1標(biāo)本來源 本院內(nèi)分泌科、心血管科符合MS(IDF定義)組分的住院病人，以及體檢中心健康體檢者，正常組11例，代謝異常組

9、45例，采血前2周內(nèi)未使用抗血小板藥物，35-74歲成年人，性別不限。 2觀察內(nèi)容 (1)ADP誘導(dǎo)的正常人和代謝異?；颊叩腜AG(M)； (2)胰島素對(duì)PAG(M)作用的量效關(guān)系； (3)GTN對(duì)PAG(M)作用的量效關(guān)系； (4)PAG(M)與各體質(zhì)指標(biāo)及生化指標(biāo)的關(guān)系； (5)胰島素孵育后PRP血漿中NO水平；以及PAG(M)與胰島素濃度、NO水平間的關(guān)系。 (6)研究對(duì)象的

10、其他體質(zhì)指標(biāo)及生化指標(biāo)，包括身高、體重、腰圍、血壓、血糖、血HDL-C、血LDL-C、血TG、空腹胰島素水平及血ALT、AST、Bun及Cr水平，上述指標(biāo)均按標(biāo)準(zhǔn)方法在實(shí)驗(yàn)當(dāng)日采取。 3實(shí)驗(yàn)方法 (1)血小板聚集功能(Platelet aggregation，PAG)測(cè)定空腹12小時(shí)后采肘靜脈血4.5mL，用3.8﹪枸櫞酸鈉溶液(按1∶9)抗凝，800r/min離心8分鐘獲取PRP，再將剩余血標(biāo)本3000r/min離心1

11、0分鐘，取上清液即為PPP，在光學(xué)顯微鏡下用計(jì)數(shù)板法測(cè)定PRP中血小板濃度，并用PPP將PRP調(diào)整至(250～350)×10<'9>/L，經(jīng)PPP調(diào)零，在LG-PABER血小板聚集凝血因子分析儀上連續(xù)測(cè)量5分鐘，以PAG(M)為觀察指標(biāo)。ADP的終濃度均為5umol/L。 (2)NO測(cè)定對(duì)照組及胰島素孵育組PRP經(jīng)聚集反應(yīng)后，再將PRP 3000r/min離心10分鐘，取上清液置于EP管中，放置-20℃冰箱保存，待集中測(cè)定。采用

12、NO試劑盒(硝酸還原酶法)，嚴(yán)格按試劑說明進(jìn)行操作。分別取血標(biāo)本100ul進(jìn)行測(cè)定，加入試劑1、2，混勻后37℃水浴60分鐘，然后再加入試劑3、4，混勻靜置40分鐘后，3800轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清液0.4ml置于塑料試管中，并加入顯色劑0.6ml，混勻，室溫下靜置10分鐘，以蒸餾水調(diào)零，550nm波長(zhǎng)，0.5cm光徑，以7230G分光光度計(jì)測(cè)定各管吸光度值。 NO含量=(測(cè)定管吸光度一空白管吸光度)/(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度-空白管吸光度)

13、 ×100umol/L。 (3)各項(xiàng)體質(zhì)指標(biāo)按標(biāo)準(zhǔn)方法在實(shí)驗(yàn)當(dāng)日進(jìn)行測(cè)量； (4)其余各項(xiàng)指標(biāo)同時(shí)在本院生化實(shí)驗(yàn)室及內(nèi)分泌實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行測(cè)定。 4統(tǒng)計(jì)分析 (1)所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，檢驗(yàn)水準(zhǔn)定為P≤0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (2)抑制率的計(jì)算公式：抑制率(﹪)=(空白對(duì)照組-用藥后值)/空白對(duì)照組×100﹪ (3)計(jì)量資料的描述用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。 (4

14、)兩獨(dú)立樣本均數(shù)的t檢驗(yàn)。 (5)多組均數(shù)比較的方差分析。 (6)變量間的相關(guān)分析。 (7)多因素的線性回歸分析。 結(jié)果: 1 ADP(5umol/L終濃度)為誘導(dǎo)劑時(shí)，正常組(11例)平均：PAG(M)為(46.55±6.53)﹪；代謝異常組45例，其平均PAG(M)為(61.99±10.43)﹪；經(jīng)獨(dú)立樣本均值的t檢驗(yàn)，P<0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中1、2、3、4、5項(xiàng)代謝異常組PAG(

15、M)(﹪)分別為： 48.58±6.35、61.83±10.11、66.53±8.20、67.44±7.12及65.13±4.55，進(jìn)行方差分析發(fā)現(xiàn)：1項(xiàng)代謝異常組PAG(M)與正常組比較，P值=0.563，兩組差值沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而2、3、4、5項(xiàng)代謝異常組PAG(M)與正常組比較，P值均P<0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2 GTN呈濃度依賴的方式抑制血小板聚集，正常組與代謝異常組的GTNIC50分別為33、56umol/L。

16、 3胰島素呈濃度依賴的方式抑制血小板聚集，正常組與代謝異常組的胰島素IC50分別為597、1353pmol/L。 4正常組與代謝異常組的平均年齡沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，體重指數(shù)、腰圍、血壓、血TG、血HDL-C、血LDL_C、血糖及IN(HOMA-IR)均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異?？紤]到肥胖、血壓、血糖、血TG、血HDL-C以及血LDL_C對(duì)血小板聚集功能的影響，我們以：PAG(M)為因變量，腰圍、血壓、血糖、血TG、血HDL-C以及血L

17、DL C作為自變量，進(jìn)行多因素的線性回歸分析，發(fā)現(xiàn)：腰圍、血糖及舒張壓納入回歸方程。 5胰島素孵育后PRP血漿中NO水平升高；隨胰島素濃度升高，NO水平升高，而PAG(M)降低。 結(jié)論: 1 ADP誘導(dǎo)的PAG(M)在2項(xiàng)及2項(xiàng)以上代謝異常的MS患者明顯升高。 2 GTN以濃度依賴的方式抑制血小板聚集，但在代謝異常患者其抑制血小板聚集的作用較正常人降低，說明代謝異常患者血小板存在GTN抵抗。 3