清肺培元顆粒對(duì)免疫低下肺部感染小鼠T淋巴細(xì)胞亞群和IL-6、PCT影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、　　目的：
　　建立免疫低下肺部感染小鼠模型,探討清肺培元顆粒對(duì)免疫低下肺部感染模型小鼠外周血T細(xì)胞亞群和血清中白介素6(IL-6)、降鈣素原(procalcitonin,PCT)含量的影響,從而試述清肺培元顆粒對(duì)免疫低下肺部感染的作用機(jī)理,為清肺培元顆粒的臨床廣泛應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.動(dòng)物分組：將90只健康清潔級(jí)近交系BALB/C小鼠,按照隨機(jī)數(shù)字表法分為9組即：正常對(duì)照組、Friend

2、鼠白血病病毒(FLV)組、模型組、齊多夫定組(AZT)組、唐草片組、清肺培元顆粒加鹽酸左氧氟沙星組(中西藥組)、清肺培元顆粒高劑量組、清肺培元顆粒中劑量組、清肺培元顆粒低劑量組,每組10只。
　　2.動(dòng)物造模與用藥：適宜性喂養(yǎng)3天后,除正常組外各組小鼠每只腹腔注射配比好的FLV病毒的懸濁液0.5ml,觀察21天。小鼠出現(xiàn)毛皮無(wú)光澤、活動(dòng)度降低、尾部顏色晦暗,脾臟明顯腫大等體征后,采用滴鼻法對(duì)小鼠進(jìn)行Ⅲ型肺炎鏈球菌(Strept

3、ococcus pneumoniae,S.pn)接種,每只約滴入50μl,觀察7天。待復(fù)合模型成功后各治療組給予相應(yīng)藥物和劑量進(jìn)行干預(yù),正常組、FLV組、模型組給予與藥液同體積的生理鹽水。
　　3.指標(biāo)測(cè)定：每天觀察并記錄小鼠一般狀況,末次給藥后,摘眼球取血處死小鼠,取脾臟、肺臟、胸腺,計(jì)算其臟器指數(shù)；光鏡下觀察小鼠肺組織蘇木素-伊紅(HE)染色后病理學(xué)改變；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠外周血中CD4+T、CD8+T細(xì)胞含量,計(jì)數(shù)CD4

4、+/CD8+的比值；酶聯(lián)免疫吸附(enzyme-linked immune sorbent assay, ELISA)法測(cè)定小鼠血清中IL-6及PCT含量。
　　結(jié)果：
　　1.成功復(fù)制免疫低下肺部細(xì)菌感染小鼠模型；
　　2.小鼠一般情況比較結(jié)果：正常組毛發(fā)有光澤,活動(dòng)、飲食、體重均正常。FLV組和模型組毛發(fā)光澤度欠佳,豎毛現(xiàn)象嚴(yán)重,活動(dòng)度逐漸減少,飲食明顯減少,體重減輕。AZT組、唐草片組和清肺培元顆粒低

5、劑量組毛發(fā)無(wú)光澤,有豎毛現(xiàn)象,活動(dòng)逐漸減少,飲食下降,體重變化不大。中西藥組、清肺培元顆粒高劑量組和清肺培元顆粒中劑量組毛發(fā)、活動(dòng)、飲食、體重與正常組相比均無(wú)顯著改變；
　　3.小鼠體重比較結(jié)果：與正常組相比,中西藥組及清肺培元三個(gè)劑量組,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),FLV組及模型組小鼠體重均低于正常組,而 AZT組和唐草片組小鼠體重均高于正常組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組相比,FLV組、中西藥組及清

6、肺培元顆粒低劑量組,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),其他各組小鼠體重均高于模型組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與AZT組相比,FLV組、中西藥組及清肺培元顆粒低劑量組小鼠體重均低于AZT組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其他各組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與FLV組相比,清肺培元顆粒低劑量組及模型組,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),其他各組小鼠體重均高于FLV組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。清肺培元

7、顆粒高、中、低劑量組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；
　　4.臟器質(zhì)量及臟器系數(shù)比較結(jié)果：①胸腺質(zhì)量：與正常組相比, FLV組、模型組及清肺培元顆粒低劑量組小鼠胸腺質(zhì)量均低于正常組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其他各組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與模型組相比,各組小鼠胸腺質(zhì)量均高于模型組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與AZT組相比, FLV組、模型組及清肺培元顆粒低劑量組小鼠胸腺質(zhì)量均低于A

8、ZT組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其他各組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與FLV組相比,清肺培元顆粒低劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),模型組小鼠胸腺質(zhì)量低于FLV組,其他各組小鼠胸腺質(zhì)量均明顯高于FLV組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。清肺培元顆粒高、中、低劑量組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；②胸腺指數(shù)：與正常組相比,FLV組及模型組小鼠胸腺指數(shù)均低于正常組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)

9、,其他各組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與模型組相比,各組小鼠胸腺指數(shù)均高于模型組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與AZT組相比,FLV組及模型組小鼠胸腺指數(shù)均低于AZT組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其他各組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與FLV組相比,唐草片組、清肺培元顆粒中劑量組及清肺培元顆粒低劑量組,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),模型組小鼠胸腺指數(shù)低于FLV組,其他各組小鼠胸腺指數(shù)均高于FLV組,差

10、異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。清肺培元顆粒高、中、低劑量組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；③脾臟質(zhì)量：與正常組相比,各組小鼠脾臟質(zhì)量均高于正常組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組相比,FLV組小鼠脾臟質(zhì)量高于模型組,其他各組小鼠脾臟質(zhì)量均低于模型組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與AZT組相比,正常組小鼠脾臟質(zhì)量低于AZT組,其他各組小鼠脾臟質(zhì)量均高于AZT組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與

11、FLV組相比,清肺培元顆粒低劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),其他各組小鼠脾臟質(zhì)量均低于FLV組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；清肺培元顆粒高、中、低劑量組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；④脾臟指數(shù)：與正常組相比,AZT組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),其他各組小鼠脾臟指數(shù)均高于正常組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)；與模型組相比,FLV組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其他各組小鼠脾臟指數(shù)均低于模型組

12、,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與AZT組相比,正常組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),其他各組小鼠脾臟指數(shù)均高于AZT組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與FLV組相比,模型組及清肺培元顆粒低劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),其他各組小鼠脾臟指數(shù)均低于 FLV組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。清肺培元顆粒高、中、低劑量組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　5.小鼠外周血CD3+、CD4+

13、、CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量及CD4+/CD8+T比值結(jié)果：模型組與正常對(duì)照組比較CD3+、CD4+、CD8+有顯著差異(P<0.05),再次證明FLV病毒攻擊液可以明顯抑制小鼠T淋巴細(xì)胞,與模型組相比,用藥后清肺培元顆粒三個(gè)劑量組小鼠,CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞水平及CD4/CD8比值明顯升高,同時(shí)降低CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量(P<0.05)；
　　6.病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果：模型組肺內(nèi)可見(jiàn)以細(xì)支氣管為中心波及周圍肺組織的散在病灶,細(xì)支

14、氣管上皮細(xì)胞出現(xiàn)纖毛倒伏、細(xì)胞變性壞死等損傷性改變,伴炎癥反應(yīng),可見(jiàn)大量中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞滲出,各治療組病理學(xué)改變較模型組輕,中西藥組、清肺培元顆粒中、高劑量組改善明顯；
　　7.細(xì)胞因子IL-6、PCT檢測(cè)結(jié)果：免疫低下肺部細(xì)菌感染模型小鼠血清中IL-6、PCT表達(dá)水平均較正常組增高(P﹤0.05),而較模型組明顯降低(P﹤0.05)。
　　結(jié)論：
　　1. 成功建立免疫低下肺部感染小鼠模型,